2007 Fiscal Year Annual Research Report
ENUミュータジェネシスにおける高速突然変異検出法
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19650106
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
真下 知士 Kyoto University, 医学研究科, 産学官連携准教授 (80397554)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中島 玲子 大学共同利用機関法人情報システム研究機構, 融合プロジェクト, 特任研究員 (50372595)
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| Keywords | ラット / ミュータジェネシス / トランスポゾンMu / スクリーニング / ポジショナルクローニング / ゲノムDNA / メッセンジャーRNA |
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| Research Abstract |
ラットENUミュータジェネシスにより作製された多数のミュータント動物の中から、標的遺伝子に点突然変異の導入された個体のみを効率的に検出するスクリーニング方法の開発を目的とした。
(1)ENU誘発突然変異動物群のゲノムDNAスクリーニング法
我々は、ENUミュータジェネシスプロジェクトを行っており、約5000匹のENU誘発突然変異ラットのDNAバンクと精子バンクをアーカイブとして保存している。このラットミュータントアーカイブ5000を対象として、以下のごとくスクリーニング方法についての効率化を行った。蛍光標識Mu-END DNAによるMu反応(20℃、5分)の検討。自動キャピラリー電気泳動装置(ABI3100)による電気泳動法の検討。コンピューター解析により標的遺伝子の点突然変異保有個体を検出方法の検討。
(2)突然変異動物個体のメッセンジャーRNAスクリーニング
標的遺伝子合成cDNAプローブと、ENU誘発突然変異個体由来メッセンジャーRNAをハイブリダイゼーションさせ、Mu反応により点突然変異遺伝子を同定する方法について、以下の点を検討した。ENU誘発突然変異個体からメッセンジャーRNAの抽出。標的遺伝子のcDNAプローブによるmRNAとのハイブリダイゼーション反応、およびMu反応の検討。自動キャピラリー装置による電気泳動法の検討。
引き続き、上記2種類のスクリーニング法について検討を行う。
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