2007 Fiscal Year Annual Research Report
リガンドスクリーニングのためのケミカルプロテオミクス手法の開発
Project/Area Number |
19651089
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
酒井 寿郎 The University of Tokyo, 先端科学技術研究センター, 特任教授 (80323020)
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Keywords | ケミカル / ネイティブ蛋白 / 核内受容体 / 高親和性抗体 / 転写複合体 |
Research Abstract |
微量に存在する核内受容体蛋白質をターゲットに高親和性抗体-磁気ビーズを用いたプロテオミクスを行うことで、複合体のストイキオメトリーを壊さずに、転写複合体が構造の類似した合成リガンドの濃度・時間によって遷移する様を追跡する系を樹立した。本研究ではバキュロウィルス上に融合蛋白を発現させた蛋白質を免疫する方法)によって作成した高親和性抗体(Kd 10^<-8>以下)を低ノイズ磁気ビーズに固定化させ、サンプル調整を行うことにより、現在のプロテオミクス解析を更に効果的なものとした。3T3-L1脂肪細胞では、スプライソゾームや蛋白のinitiation complexに関わる蛋白など、これまであまり報告のない蛋白が再現良く取れた。さらに、生体内の核内受容体によるシグナルはリガンドの多様性により決定されることから、PPARγの合成された種々近縁の多様なアゴニストリガンドによって変動するデータを比較検討することを行っている。これはアゴニスト作用のある種々類似の薬剤でのプロテオミクスは、大量のデータを意味づけるうえで重要である。しかしながら、ショットガンプロテオミクスの方法では、まだ、特異性を決めるにはデータのばらつきが多く、また、アゴニストリガンドによる変動も必ずしも再現が取れるわけではなくデータのvalidationには更なる最適化が必要である。
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Research Products
(5 results)