2008 Fiscal Year Annual Research Report
制限酵素を用いたヒトゲノム上へのDNA二重鎖切断導入とその修復課程の解析
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19657004
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
篠原 美紀 Osaka University, 蛋白質研究所, 准教授 (80335687)
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| Keywords | DNA傷害修復 / DNA二重鎖切断 / 非相同末端結合 / 相同組換え |
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| Research Abstract |
ヒト培養細胞HeLaS3細胞を用いて、制限酵素BamHIによりDSBを導入させ、薗修復過程についてサイトロジーをもちいて解析を行った。その結果、DNA二重鎖切断のマーカーであるヒストンH2Aのリン酸化と相同組換えを行うRad51の局在を経時的に観察することが出来た。一方、NHEJに必須であるDNAリガーゼIVについて、Ligase-IVとその制御サブユニットであるXrcc4タンパク質に対する抗体を作成してその局在について解析を行ったがRad51等の相同組換え因子とは異なりFociとしては観察することが出来なかった。酵母においてそれらのホモログであるDn14あるいはLif1タンパク質に対して同様の解析を行ったがヒト細胞と同様にFociとしては観察することが出来なかった。しかし、酵母においてはChIPでこれらの因子のDSB末端への集積を検出することが出来たことから、ヒト細胞についても同様の方法を導入し、これらの修復タンパク質のDSB末端への集積と解離についてその経時変化について解析を行っていく予定である。
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