2007 Fiscal Year Annual Research Report
組織障害の新指標:膜インターフェースにおける骨格蛋白質のヒドロキシノネナール修飾
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19658116
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
稲葉 睦 Hokkaido University, 大学院・獣医学研究科, 教授 (00183179)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐藤 耕太 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 准教授 (50283974)
高桑 雄一 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (40113740)
大塚 弥生 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 特任准教授 (30396303)
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| Keywords | 細胞膜 / 膜骨格 / 脂質過酸化 / 組織傷害 / ヒドロキシノネナール / 酸化障害 |
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| Research Abstract |
A.比重分離法によって老化〜幼若赤血球に分けた赤血球、酸化剤により人為的に過酸化傷害を生じさせた赤血球、それぞれのスペクトリン、あるいは精製スペクトリンについて、4HNE付加量を抗4HNE抗体でのイムノブロット、ならびにプロテアーゼ分解フラグメントのMALDI-TOF MS解析で比較した。その結果、生理的な赤血球加齢では顕著な4HNE修飾の増加がみられないものの、脂質過酸化にともなって著しい4HNEの付加がスペクトリンに生じることが明らかになった。修飾部位は、α-、β-スペクトリンともに、膜脂質との相互作用が示唆されている領域に集中していた。
B.β-スペクトリンのN末端領域ポリペプチドをGST融合蛋白質としてE.coliで合成、精製し、上記同様の解析を行ったところ、大腸菌での合成時、既に一定量の4HNE修飾が生じていることが示された。
C.スペクトリンと脂質間の結合、ならびにスペクトリンと他の蛋白質との結合、あるいはスペクトリンのオリゴマー形成に対する4HNE修飾の影響を検討するために、数種の組み換えスペクトリンを大腸菌で合成・精製する作業を進めている。
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