| Research Abstract |
個々の癌細胞の取り込んだシスプラチンが画像化,定量化できれば,シスプラチン感受性やシスプラチン耐性機構の解析のために,重要な情報をもたらすと考えられる。本研究ではヒト癌細胞へのシスプラチンの取り込み,引き続きおこる核への分布,細胞からの排泄を,大気マイクロピクシー技術により画像解析し,抗腫瘍効果の発現との関係について明らかにする。
大気マイクロPI)EによるPtの定量性を確認するために,標準試料(Pt濃度を変化させた寒天を20μmに薄切し凍結乾燥したもの)を作成し,測定を行った。,細胞はヒト肺腺癌細胞であるA549を用いて,10μMのBrdUでパルスラベルした対数増殖期の細胞を5μm厚のマイラーフィルム上で培養し,生着したことを確認した後,1mMのシスプラチンを接触させた。接触時間は30分から24時間とした。薬剤に接触後,THAMバッファーで6回洗浄した後,急速凍結乾燥した。解析は日本原子力研究開発灘高崎量子応用研究所の大気マイクロPIXE測定装置を用いた。
標準試料を用いた解析では,試料内のシスプラチン濃度と測定されたPtの間に直線性が明らかであった。培養細胞試料では,P,K,Clなどの細胞の局在を示す元素,BrdUでラベルした核内Brおよび細胞に取り込まれたPtが検出可能であった。シスプラチン接触時間の延長とともに,細胞内Ptおよび核内Ptのカウントの増加が観察され,直線性が認められた。大気マイクロピクシーは生物試料に応用可能であるが,さらに検出感度をあげる工夫により,詳細な観察が可能と考えられた。
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