2008 Fiscal Year Annual Research Report
ヒトリンパ球細胞TK6のゲノム内に導入させたDNA付加体の突然変異誘発機構
Project/Area Number |
19710059
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Research Institution | National Institute of Health Sciences |
Principal Investigator |
安井 学 National Institute of Health Sciences, 研究員 (50435707)
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Keywords | DNA損傷 / DNA付加体 / 8-オキソグアニン / 活性酸素 / 突然変異誘発 / チミジンキナーゼ遺伝子 / 化学発癌 / 炎症性発癌 |
Research Abstract |
本研究の目的は,様々なDNA付加体をヒトTK6細胞のゲノム内で解析するために,まず代表的なDNA付加体である8-オキソグアニンを1つ含むターゲティングベクターを作製することから始め,「ゲノム内」における8-オキソグアニンの突然変異誘発頻度とスペクトルを解析できる実験系を確立することである。初年度は,8-オキソグアニンを部位特異的に挿入させた6.1kbpターゲティングベクターを効率よく合成できる系を確立した。この系は,8-オキソグアニンだけでなく他のDNA付加体も挿入させることが可能で,これまで報告されている合成系と異なり,二本鎖DNAの両鎖に自由にDNA付加体を複数挿入させることができる。最終年度は,チミジンキナーゼ遺伝子(TK)を指標とした復帰突然変異試験系(8-オキソグアニンがアデニンと誤塩基対形成した時に復帰)を確立した。さらに,ゲノム内における8-オキソグアニンの突然変異誘発スペクトルを解析できる実験系も確立した。8-オキソグアニンを導入した時のTK復帰細胞の出現頻度は,グアニン(陰性対照)を導入した時と比べ,約19%増加した。これは,正常塩基であるグアニンはシトシン(復帰細胞は得られない)とだけ塩基対形成するのに対し,8-オキソグアニンはシトシンだけでなく,約19%の頻度でアデニン(復帰細胞が得られる)とも誤塩基対形成したことを示している。また,イントロン内に導入させた8-オキソグアニン部位を調べるとチミン(約15%)あるいはアデニン(約3%)に変異していた。現在,本研究によって確立された実験系の信憑性や再現性について調べている。
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Research Products
(4 results)
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[Journal Article] Miscoding properties of 2'-deoxyinosine, a nitric oxide-derived DNA Adduct, during translesion synthesis catalyzed by human DNA polymerases.2008
Author(s)
Yasui M, Suenaga E, Koyama N, M asutani C, Hanaoka F, Gruz P, Shibutani S, Nohmi T, Hayashi M, and Honma M.
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Journal Title
Journal of Molecular Biology 377
Pages: 1015-1023
Peer Reviewed
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[Presentation] Emergence and Fate of Micronuclei by Fluorescent Live Cell Imaging Analysis.2008
Author(s)
Yasui, M., Koyama, N., Koizumi, T., Sakuraba, M., Sakamoto, H., Takashima, Y., Sugimoto, K., Hayashi, M., and Honma, M.
Organizer
American Association of Cancer Research
Place of Presentation
アメリカ合衆国カリフォルニア州
Year and Date
20080412-16