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2008 Fiscal Year Annual Research Report

Arsインスレーター作用機構の解明

Research Project

Project/Area Number 19770005
Research InstitutionHiroshima University

Principal Investigator

坂本 尚昭  Hiroshima University, 大学院・理学研究科, 准教授 (00332338)

Keywordsインスレーター / クロマチン
Research Abstract

Arsインスレーターのクロマチン構造形成能を解析するために、バフンウニ初期型ヒストン遺伝子を用いて、リコンビナントウニヒストンを調製した。その際、合成効率の低かったH2AとH4については、コドンを大腸菌に最適化した人工遺伝子を作製して、リコンビナントウニヒストンの調製に用いた。これらのリコンビナントウニヒストンを用いてArsインスレーター断片上にクロマチンを再構成し、またポジティブコントロールとして、ウニLytechinus variegatusの5S rDNA断片(208bp)を3個連結したものを用いた。再構成されたことを確認した後、マイクロコッカルヌクレアーゼ(MNase)に対する感受性を調べたところ、Arsインスレーターの中央部分から下流側領域においてMNaseに対する高い感受性が検出された。また、Arsインスレーターの上流側領域においてはヌクレオソームのポジショニングによりMNaseによる切断から保護される領域が検出された。
Arsインスレーターの活性中心領域を検索するために、Arsインスレーターの欠失変異体を作製し、エンハンサーとプロモーターの間に挿入したレポーター遺伝子を構築した。これを用いてArsインスレーター欠失変異体のインスレーター活性を測定したところ、Arsインスレーターの中央部付近にインスレーター活性に重要なコア領域が存在することが示唆された。
以上の結果を総合的に解析すると、Arsインスレーターのヌクレアーゼ感受性を示す部位とArsインスレーター活性のコア領域には相関がみられたことから、この領域における開かれたクロマチン構造がArsインスレーターの活性に重要であることが示唆された。今後、Arsインスレーター機能における結合タンパク質の役割についても検討したい。

  • Research Products

    (3 results)

All 2008

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] The Ars insulator facilitates I-SceI meganuclease-mediated transgenesis in the sea urchin embryo2008

    • Author(s)
      落合博
    • Journal Title

      Developmental Dynamics 237

      Pages: 2475-2482

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] バフンウニ初期発生におけるDicerホモログの機能解析2008

    • Author(s)
      岡光憂佳
    • Organizer
      日本動物学会第79回大会
    • Place of Presentation
      福岡大学七隈キャンパス
    • Year and Date
      2008-09-06
  • [Presentation] バフンウニvasa(Hp Vasa)遺伝子の発現と機能2008

    • Author(s)
      住吉範子
    • Organizer
      日本動物学会第79回大会
    • Place of Presentation
      福岡大学七隈キャンパス
    • Year and Date
      2008-09-05

URL: 

Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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