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2007 Fiscal Year Annual Research Report

大腸菌グリコーゲンリン酸化酵素の同定と機能解析

Research Project

Project/Area Number 19780072
Research InstitutionMie University

Principal Investigator

磯野 直人  Mie University, 大学院・生物資源学研究科, 助教 (70378321)

Keywordsグリコーゲン / デンプン / リン酸化 / 大腸菌
Research Abstract

グリコーゲンのリン酸化酵素はグリコーゲン合成時に多く発現すると考え,はじめに各種大腸菌がどのような条件でグリコーゲンを蓄積するか調べた.遺伝子工学で良く用いられているJM109株やBL21株はグリコーゲンをほとんど蓄積しなかったため,酵素精製の材料としては不適であると判断した.一方,Kornberg培地中で培養したBW25113株は,培養24時間後に最大量のグリコーゲンを蓄積した.BW25113株から超音波破砕および超遠心法により調製したグリコーゲンを酸加水分解し,グルコース6リン酸脱水素酵素を用いて結合リン酸量の測定に供したところ,2.0nmol/mgとリン酸化されていることが明らかとなった.したがって,本大腸菌はグリコーゲンリン酸化酵素を生産していることが予測された.また,デンプンのリン酸化酵素であるGlucan water dikinaseを本大腸菌に導入したところ,グリコーゲンの結合リン酸量が約3倍に増加したことから,このように調製したグリコーゲンは酵素活性測定の基質としても利用できると判断した.現在,この大腸菌の超音波破砕液から各種クロマトグラフィーによって精製を行っているが,酵素活性の測定方法を改善する必要があると考えられ,タンパク質の同定には至っていない.また,BW25113株は系統的な遺伝子破壊ライブラリーであるKeio collectionの親株であるため,場合によってはこのコレクションを用いて非リン酸化グリコーゲンを蓄積する大腸菌を探索することも可能ではないかと考えている.

  • Research Products

    (6 results)

All 2008 2007

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (4 results)

  • [Journal Article] Structural, thermal and viscoelastic properties of potato starches.2008

    • Author(s)
      Singh, et. al.
    • Journal Title

      Food Hydrocolloids 22

      Pages: 979-988

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Enzymatic characterization of starch synthase III from kidney bean (Phaseolus vulgaris L.)2007

    • Author(s)
      Senoura, et. al.
    • Journal Title

      FEBS Journal 274

      Pages: 4550-4560

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] サゴヤシデンプンの種間差2008

    • Author(s)
      三島隆, 江原宏, 内藤整, 溝田智俊, 磯野直人, 久松眞
    • Organizer
      日本農芸化学会2008年度大会
    • Place of Presentation
      愛知県名古屋市
    • Year and Date
      2008-03-27
  • [Presentation] デンプンの構造から特性を予測する2007

    • Author(s)
      磯野直人
    • Organizer
      第5回糖鎖科学名古屋拠点「若手の力」フォーラム
    • Place of Presentation
      愛知県名古屋市
    • Year and Date
      2007-09-15
  • [Presentation] 澱粉結晶領域の微細構造と物性に関する研究2007

    • Author(s)
      布目知広, 加藤拓也, 橋本和樹, Sathaporn Srichuwong, 三島隆, 磯野直人, 久松眞
    • Organizer
      日本応用糖質科学会2007年度大会
    • Place of Presentation
      神奈川県藤沢市
    • Year and Date
      2007-08-29
  • [Presentation] 採取地の異なるサゴヤシデンプンの比較2007

    • Author(s)
      三島隆, 江原宏, 内藤整, 溝田智俊, 磯野直人, 久松眞
    • Organizer
      第16回サゴヤシ学会講演会
    • Place of Presentation
      東京都豊島区
    • Year and Date
      2007-06-17

URL: 

Published: 2010-02-04   Modified: 2016-04-21  

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