| Research Abstract |
X連鎖童症複合免疫不全症に対する遺伝子治療では,治療用のMLVベクターの挿入変異によるがん遺伝子の異常活性化が起こり,結果として白血病が発生した。このため,MLVベクターの挿入変異の解明は,遺伝子治療の安全性を考える上で重要課題である。我々は,T細胞株におけるMLVベクターの組み込み部位を解析し,転写開始点近傍への組み込みが有意に起こること,その組み込み指向性が挿入変異に関与する可能性を報告してきた。本年度は,MLVベクターの挿入変異のメカニズムを解析し,以下の実験結果を得た。MLVベクター感染T細胞クローニンを用炉て,標的遺伝子の転写(mRNAレベル)への影響を検討したところ,MLVベクターが転写開始点近傍に組み込まれたT細胞クローンでは,コントロールに比べて,有意にmRNAの発現量が増加していた。この転写活性化と,MLVベクター由来のウイルスRNAと標的遺伝子RNAとが融合したFusion transcriptの産生量との間に正の相関を認めた。さらに,ウイルスプロモターによる直接的な標的遺伝子の活性化を見出した。これらの結果から,MLVベクターの転写開始点近傍への組み込み指向性が,標的遺伝子の転写調節異常に関与することを示唆した。さらに,先述した白血病症例で,ベクター挿入変異により活性化したがん遺伝子に着目し,その転写開始点近傍への組み込み部位を詳細に解析したところ,同一遺伝子の限られた領域においても,組み込みパターンおよびその頻度に差異があるという予備的な知見を得た。現在,MLVベクターの組み込み指向性を制御する細胞因子の探索も進めている。
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