2007 Fiscal Year Annual Research Report
| Project/Area Number |
19800039
|
|---|
| Research Institution | Health Sciences University of Hokkaido |
|---|
Principal Investigator |
伊藤 勝敏 Health Sciences University of Hokkaido, 歯学部, 助教 (50433438)
|
|---|
| Keywords | 骨形成タンパク質 / BMP-2 / ヒト / 歯髄 / 再生 |
|---|
| Research Abstract |
実験I
ヒト歯髄組織を抜去歯から採取し、採取した歯髄組織からtotal RNAを抽出したのち、逆転写酵素を用いてcDNAを作製する。作製したcDNAを用いてPCRをおこない、BMPを含めた組織再生遺伝子の解析をおこなう。
結果 この実験において、ヒト歯髄組織にはBMP-2、BMP-4、BMP-6、BMP-7の各BMP遺伝子が存在することを確認し、さらにALP、OPN、OCN、DSP、MGP、DSP-1、MSX-2といった硬組織関連遺伝子が発現していることを確認した。
実験II
ヒト歯髄組織を抜去歯から採取し、採取した歯髄組織を用いてSDS-PAGEによるタンパク質分布の解析をおこなう。また、組織再生因子の抗体を用いてウェスタンブロッティングをおこない、組織再生タンパク質の発現状態を解析する。さらに前駆体で存在するタンパク質が意図的にプロセッシング可能かを解析する。
結果 この実験において、ヒト歯髄組織中のBMP-2、BMP-4、BMP-6、BMP-7の各タンパク質は、既知の分子量よりも高い値を示した。また、OPN、OCN、DSPの各タンパク質も検出したが、いずれも既知の値より高い分子量を示した。
実験III
組織再生因子のタンパク質認識配列部(CDS)をtagベクターへ組み込み、COS7等の細胞にトランスフェクションし融合タンパク質を発現させる。融合タンパク質を回収した後、実験IIと同様にSDS-PAGEとウェスタンブロッティングをおこない、発現状態を解析する。
結果 この実験において、ヒト歯髄組織中の組織再生タンパク質のうち、BMP-2タンパク質は前駆体の状態で存在することが証明され、何らかの直接あるいは間接刺激において成熟型に分泌されることが示唆された。
|
Research Products
(1 results)
