2020 Fiscal Year Annual Research Report
Molecular characterization of virulence mechanisms of shrimp pathogenic virus WSSV
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19H00949
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| Research Institution | Tokyo University of Marine Science and Technology |
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Principal Investigator |
廣野 育生 東京海洋大学, 学術研究院, 教授 (00270926)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
近藤 秀裕 東京海洋大学, 学術研究院, 教授 (20314635)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | クルマエビ / 病原ウイルス / ホワイトスポット病ウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
①クルマエビ類ゲノムに存在するWSSV類似化石ウイルスを遺伝子工学手法による復元
：化石ウイルスのゲノム完全長をクローン化するためにPCRによるDNA断片の増幅を行い、大腸菌に導入する実験を行ったが、配列中に大腸菌内では安定に存在できない配列があることが示唆された。そこで、PCRで増幅する領域を短くし大腸菌に導入する実験を行ったところ、大腸菌内で安定に存在できない領域を確認できた。今後、まずはこの領域を除いてWSSV類似化石ウイルスを復元するための実験を進める予定である。
②WSSVに特異的に存在する遺伝子を復元化石ウイルスに導入したキメラウイルスの作製とWSSVの病原性メカニズムの解明：WSSVに近縁なズワイガニ由来の現存ウイルスのゲノム、化石ウイルスとWSSVのゲノム比較解析を行い、WSSVに特異的に存在する遺伝子を特定した。今後、これらの遺伝子の発言プロファイリングを行い、病原性との関係解明を進める
③WSSV類似化石ウイルスゲノムに存在する遺伝子から転写されるmRNAの機能：昨年度に調べた化石ウイルスゲノム遺伝子より転写される遺伝子群の中に、特定の組織・臓器でのみ転写されている遺伝子が見つかった。今後、この様な特異的な発現動態を示す遺伝子とWSSV感染との関係を検討する。
④WSSVの感染・発症抑制に関する研究：複数種類の微生物を用いてWSSVの感染あるいは発症を抑制することができる機能を有しているかについて調べたところ、WSSVの感染を抑制している可能性がある微生物を見つけることができた。今後、感染抑制に関するメカニズムについて詳細な解析を進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
クルマエビとWSSVとの相互作用を解明するためのツールとして、クルマエビの遺伝子配列情報は重要であり、クルマエビのゲノム配列情報より遺伝子配列情報のデータベースを構築できたこや、WSSVの近縁ウイルスについてゲノムに存在する遺伝子の比較をすることができたことおよびWSSVゲノムおよび化石化WSSV類似ウイルスゲノム中に大腸菌内での複製を抑制する配列が存在することがわかり、大腸菌ないでウイルスを復元する研究について前進することができたことから、研究は概ね順調に進んでいるとが、昨年度からクルマエビ細胞への環状のDNAを導入する実験がうまく進んでおらず、原因解明のために実験条件をいろいろと試している。
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| Strategy for Future Research Activity |
クルマエビ類の継代できる株化細胞が樹立されていないことから、細胞を株化できない原因について、初代培養細胞における経時的にサンプリングして遺伝子プロファイリングを行い、遺伝子発現動態から解析を進める。
WSSVウイルスの感染あるいは発症を抑制することができる微生物を見つけることができたので、この微生物が産生する物質とWSSV感染との相互作用について解析することも実施し、WSSVの感染発症に至るメカニズムの解明に繋げる。
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