2020 Fiscal Year Annual Research Report
Next generation cancer liquid biopsy for childhood cancers using single cell analysis
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19H01056
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
檜山 英三 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 教授 (00218744)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
金輪 真佐美 (福永真佐美) 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 助教 (00284208)
栗原 將 広島大学, 医系科学研究科(医), 助教 (40724894)
外丸 祐介 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 教授 (90309352)
佐伯 勇 広島大学, 病院(医), 講師 (80452762)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 一細胞解析 / 小児がん / 質量分析 / ゲノミクス / 遊離核酸 / マイクロRNA / 腫瘍マーカー / 前臨床試験 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
広島大学に保存し得た小児がん切除検体200検体と初代培養細胞32検体と樹立した細胞株9株の細胞を一細胞に分離した検体と、これらの患者の保存検体 （血清・血漿・腹水・胸水）及び血液から直接分離した血液循環細胞（CTC）や腫瘍細胞を一細胞採取法にて分離採取しナノスプレーチップ内に凍結保存検体及び 新規検体を用いて、ダメージを最小とした細胞内注入法にてマーキングした。 一細胞解析としてのセロミクス解析では、一細胞検体と標的CTC細胞一個の細胞内蛋白発現をチップから直接LC-MSにかけて解析を継続し、神経芽腫ではカテコラミン代謝産物および解糖系酵素の変化、リンパ腫ではサイトカイン特にIL２とIL８を抽出した。さらに、一細胞解析としてのゲノミクス解析では、同様の 検体をもちいて、一細胞からのDNAとRNAをそれぞれ４種類の方法で増幅して解析した。PCR法および次世代シークエンス法にて増幅法による差異を検証し、最適の増幅法は、DNAはランダムプライマーとphi29 DNAポリメラーゼを用いたMultiple Displacement Amplification （MDA）法が、RNA発現は、架 橋型人工核酸であるLNA(Locked nucleic acid)技術によるプレート・スイッチング法が有用と考えられた。 また、血清(血漿)中遊離腫瘍核酸(ctDNA）を分離し、遺伝子パネルにて検討した。これらを用 いた遺伝子増幅とともにターゲット変異を高感度に検出する方法を臨床検体にて検討した。ctDNAによる診断、治療効果、再発や微小残存病変（MRD)判定マーカーとしての有用性を引き続き検討した。CTCによるコロニー形成実験と、免疫不全マウスに分離したCTCを接種し腫瘍形成能の解析を試みた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ダメージレスのセルソーティング法に時間を要したことと、コロナ禍で試薬などの入手に時間を要したことから、この一細胞分離に引き続いて行うセルテスティング、アニマルテスティングの施行が遅延した。
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| Strategy for Future Research Activity |
試薬の入手が行われ次第、研究は進めており、引き続き精力的に研究を推進し、CTCの一細胞解析に血清遊離核酸解析を合わせた小児がん患者の診断、薬剤選択、治療効果が判定を可能とするCancer liquid biopsyシステムの構築を行う方針で運用する。
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[Journal Article] The importance of age as prognostic factor for the outcome of patients with hepatoblastoma: Analysis from the Children's Hepatic tumors International Collaboration (CHIC) database2020
Author(s)
Haeberle B ,Rangaswami A ,Krailo M ,Czauderna P ,Hiyama E ,Maibach R ,Lopez-T D ,Aronson D C ,Alaggio R ,Ansari M ,Malogolowkin M H ,Perilongo G ,O'Neill A F ,Trobaugh-L A D ,Watanabe K ,Schmid I ,von S D ,Ranganathan S ,Yoshimura K ,Hishiki T ,Tanaka Y ,Piao J ,Feng Y ,Rinaldi E ,Saraceno D ,Derosa M ,Meyers R L
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Journal Title
Pediatric Blood Cancer
Volume: 67
Pages: e28350
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Outcome and Late Complications of Hepatoblastomas Treated Using the Japanese Study Group for Pediatric Liver Tumor 2 Protocol2020
Author(s)
Hiyama E ,Hishiki T ,Watanabe K ,Ida K ,Ueda Y ,Kurihara S ,Yano M ,Hoshino K ,Yokoi A ,Takama Y ,Nogami Y ,Taguchi T ,Mori M ,Kihira K ,Miyazaki O ,Fuji H ,Honda S ,Iehara T ,Kazama T ,Fujimura J ,Tanaka Y ,Inoue T ,Tajiri T ,Kondo S ,Oue T ,Yoshimura K
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Journal Title
Journal of Clinical Oncology
Volume: 38
Pages: 2488～2498
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Clinical practice guidance for next-generation sequencing in cancer diagnosis and treatment (edition 2.1)2020
Author(s)
Naito Y,Aburatani H,Amano T,Baba E,Furukawa T,Hayashida T,Hiyama E,Ikeda S,Kanai M,Kato M,Kinoshita I,Kiyota N,Kohno T,Kohsaka S,Komine K,Matsumura I,Miura Y,Nakamura Y,Natsume A,Nishio K,Oda K,Oda N,Okita N,Oseto K,Sunami K,Takahashi H,Takeda M,Tashiro S,Toyooka S,Ueno H,Yachida S,Yoshino T,Tsuchihara K
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Journal Title
International Journal of Clinical Oncology
Volume: 26
Pages: 233～283
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Optineurin regulates osteoblastogenesis through STAT12020
Author(s)
Mizuno N, Iwata T, Ohsawa R, Ouhara K, Matsuda S, Kajiya M, Matsuda Y, Kume K, Tada Y, Morino H, Yoshimoto T, Ueki Y, Mihara K, Sotomaru Y, Takeda K, Munenaga S, Fujita T, Kawaguchi H, Shiba H, Kawakami H, Kurihara H
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Journal Title
Biochem Biophys Res Commun
Volume: 525
Pages: 888～889
Peer Reviewed
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[Presentation] Refractory hepatoblastoma in the nationwide studies of Japanese Study Group2020
Author(s)
Mori, M, Watanabe K, Hishiki T, Yokoi A, Ida K, Yanao M, Fujimura J, Nogami Y, Iehara T, Hoshino K, Tanaka Y, Miyazaki O, Yoshimura K, Hiyama E
Organizer
Pediatric Liver Tumor (JPLT) 52nd Congress of the International Society of Pediatric Oncology
Int'l Joint Research
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[Presentation] Experience of real-time surgical review for patients with advanced stage hepatoblastoma in the JPLT-3 trial2020
Author(s)
Tomoro Hishiki, Kenichiro Watanabe, Makiko Mori, Akiko Yokoi, Kohmei Ida, Michihiro Yano, Junya Fujimura, Yuki Nogami, Tomoko Iehara, Ken Hoshino, Yukichi Tanaka, Osamau Miyazaki, Eiso Hiyama
Organizer
Third International Pediatric Liver Tumor Conference
Int'l Joint Research
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[Presentation] Refractory hepatoblastoma in JPLT studies2020
Author(s)
Kenichiro Watanabe, Makiko Mori, Tomoro Hishiki, Akiko Yokoi, Kohmei Ida, Michihiro Yano, Junya Fujimura, Yuki Nogami, Tomoko Iehara, Ken Hoshino, Yukichi Tanaka, Osamu Miyazaki, Kenichi Yoshida, Eiso Hiyama
Organizer
Third International Pediatric Liver Tumor Conference
Int'l Joint Research
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[Presentation] PRETEXT diagnosis: Comparison between central radiology review and local hospital in JPLT-3、Liver Tumor committee, Japan Children’s Cancer Group2020
Author(s)
Osamu Miyazaki, Eiji Oguma, Masanori Nishikawa, Yutaka Tanami, Masahiro Kitami, Takahiro Hosokawa, Hidekazu Aoki, Shinya Hattori, Kenichiro Watanabe, Kohmei Ida, Tomoro Hishiki, Eiso Hiyama
Organizer
Third International Pediatric Liver Tumor Conference
Int'l Joint Research
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