2021 Fiscal Year Annual Research Report
Next generation cancer liquid biopsy for childhood cancers using single cell analysis
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19H01056
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
檜山 英三 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 教授 (00218744)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
金輪 真佐美 (福永真佐美) 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 助教 (00284208)
栗原 將 広島大学, 医系科学研究科(医), 助教 (40724894)
佐伯 勇 広島大学, 病院(医), 講師 (80452762)
外丸 祐介 広島大学, 自然科学研究支援開発センター, 教授 (90309352)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 一細胞解析 / 小児がん / 質量分析 / ゲノミクス / 遊離核酸 / マイクロRNA / 腫瘍マーカー / 前臨床試験 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
広島大学に保存し得た小児がん切除検体200検体と初代培養細胞48検体と樹立した細胞株12株の細胞を一細胞に分離した検体と、これらの患者の保存検体 （血清・血漿・腹水・胸水）及び血液から直接分離した血液循環細胞（CTC）や腫瘍細胞を一細胞採取法にて分離採取しナノスプレーチップ内に凍結保存検体及び 新規検体を用いて、ダメージを最小とした細胞内注入法にてマーキングした。 一細胞解析としてのセロミクス解析では、一細胞検体と標的CTC細胞一個の細胞内蛋白発現をチップから直接LC-MSにかけて解析を継続し、神経芽腫ではカテコラミン代謝産物および解糖系酵素の変化、リンパ腫ではサイトカイン特にIL２とIL８などのマーカーを検出した。さらに、一細胞解析としてのゲノミクス解析では、同様の 検体をもちいて、一細胞からのDNAとRNAをそれぞれ４種類の方法で増幅して解析した。PCR法および次世代シークエンス法にて増幅法による差異を検証し、最適の増幅法は、DNAはランダムプライマーとphi29 DNAポリメラーゼを用いたMultiple Displacement Amplification （MDA）法が、RNA発現は、架橋型人工核酸であるLNA(Locked nucleic acid)技術によるプレート・スイッチング法が有用と考えられた。 また、血清(血漿)中遊離腫瘍核酸(ctDNA）を分離し、遺伝子パネルにて検討するとともにメチル化解析を行った。これらを用いた遺伝子増幅とともにターゲット変異やメチル化を高感度に検出する方法を確立した。これらは、ctDNAによる診断、治療効果、再発や微小残存病変（MRD)判定マーカーとしての有用と考えられた。CTCによるコロニー形成実験と、免疫不全マウスに分離したCTCを接種し腫瘍形成能の解析を試みたが、腫瘍形成に至らなかった。
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| Research Progress Status |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(46 results)
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[Journal Article] 【肝胆膵疾患におけるバイオマーカーの意義を探る】膵疾患のバイオマーカー 膵癌切除例のKRAS変異ctDNA解析とそのバイオマーカーとしての意義2021
Author(s)
上村 健一郎, 山口 拓朗, 近藤 成, 住吉 辰朗, 岡田 健司郎, 瀬尾 信吾, 大塚 裕之, 柴田 祥之, 檜山 英三, 村上 義昭, 高橋 信也
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Journal Title
肝胆膵
Volume: 83
Pages: 631～636
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[Presentation] 肝芽腫に対するDNAメチル化解析に基づく予後層別化の試み2021
Author(s)
近藤 享史, 本多 昌平, 鈴木 拓, 奥村 一慶, 荒 桃子, 北河 徳彦, 田中 祐吉, 田中 水緒, 新開 真人, 檜山 英三, 武冨 紹信
Organizer
第121回日本外科学会定期学術集会
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[Presentation] 広島大学での去勢抵抗性前立腺癌に対するがん遺伝子パネル検査結果2021
Author(s)
林 哲太郎, 池田 健一郎, 福島 貴郁, 井上 省吾, 亭島 淳, 岡本 渉, 難波 将史, 卜部 祐司, 中原 輝, 檜山 英三, 本永 正矩, 板村 亮, 小林 遼平, 寺谷 祐亮, 檜井 孝夫
Organizer
第59回日本癌治療学会学術集会
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[Presentation] 小児肝がん臨床試験における外科療法の選択と評価について2021
Author(s)
佐伯 勇, 栗原 将, 菱木 知郎, 本多 昌平, 高間 勇一, 鈴木 達也, 横井 暁子, 北河 徳彦, 山田 洋平, 風間 理郎, 岡島 英明, 金田 英秀, 野村 元成, 檜山 英三
Organizer
第58回日本小児外科学会
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