2022 Fiscal Year Annual Research Report
長鎖クモ糸タンパク質遺伝子の利用による高強度シルクの創出
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19H02528
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Research Institution | National Agriculture and Food Research Organization |
Principal Investigator |
小島 桂 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 生物機能利用研究部門, 上級研究員 (40370655)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2024-03-31
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Keywords | 遺伝子組換えカイコ / クモ糸シルク / オニグモ |
Outline of Annual Research Achievements |
本年度は昨年度に引き続き、オニグモ、コガネグモからの糸関連遺伝子のクローニングと、遺伝子組換えカイコの作出、及び、遺伝子組換えカイコの系統化・糸サンプル調製を進めた。 遺伝子クローニングについては、茨城県つくば市においてオニグモ(Araneus ventricosus)成体を屋外採取し、糸腺組織を採取してmRNA調整ののち縦糸タンパク質遺伝子に特異的なプライマーを用いて逆転写し、最適化したSMART法にしたがって、テンプレートスイッチから2nd strand cDNA合成したのち、In-Fusion法により発現ベクターへのcDNAのディレクショナルクローニングを行った。cDNAクローニングから、コロニーハイブリダイゼーションによるクモ糸タンパク質遺伝子を含むクローンの選抜を繰り返し、得られたクローンの得られたクローンのうち、長鎖のものから順にナノポアシーケンサによる配列確認を行い、タンパク質遺伝子として問題無い配列の選抜を行った。 遺伝子クローニングについては、昨年度以上の大きさの遺伝子の取得には至らなかった。
遺伝子組換えカイコの作出では、オニグモについて3種(MaSp1, MaSp2, MaSp3)を持つ遺伝子組換えカイコの作出に成功し、それぞれ系統化を進めた。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
遺伝子クローニングについて、当初より困難が予想されていたが、目標とする大きさの遺伝子の取得が出来ていないクローンがある。引き続き長鎖cDNAのクローニングを並行し手行う。一方、取得済みのcDNAでも、研究遂行には実質的には支障は無いと考えており,取得済みcDNAクローンで最長のcDNAを用いて課題を遂行する。
遺伝子組換えカイコの作出は概ね予定通り進行している。
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Strategy for Future Research Activity |
当初の計画通りに研究を進める。 ただし、オニグモcDNAの取得が不十分なところもあるので、他のクモ類の優先順位を下げてオニグモのcDNAクローニングと遺伝子組換えカイコの作出・解析を優先的に進めて成果を出すことを優先する。
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