Functional analyses of host factors involved in tomato spotted wilt virus RNA replication

2019 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19H02963
• Research Institution: National Agriculture and Food Research Organization
• Principal Investigator: 石橋 和大 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 生物機能利用研究部門, 主任研究員 (20611742)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: トマト黄化えそウイルス / 出芽酵母

Outline of Annual Research Achievements

先行研究で同定した、トマト黄化えそウイルス（TSWV）の複製が低下する出芽酵母変異株について、各原因遺伝子のTSWV複製における機能を解明することが本研究の大きな目標である。まず、各遺伝子のTSWV複製への関与を確認するために、実験室系統の出芽酵母W303a株を用いて、43遺伝子について遺伝子破壊株を作出した。これらの変異株のうち、再現的にTSWVの複製が低下することが確認され、さらに当該遺伝子の発現によってTSWVの複製が回復したものが8遺伝子得られた。
この8遺伝子を中心に機能の解析に着手した。TSWVタンパク質が各変異株細胞内で正常に蓄積しているか調べたところ、いくつかの変異株ではLタンパク質（RNAポリメラーゼ）の蓄積が顕著に低下しており、Lタンパク質の発現あるいは安定性に影響があると考えられた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

TSWVの複製に関与する可能性がある候補遺伝子について、欠失変異株の作出と相補試験を行い、8遺伝子について肯定的な結果を得ることができた。

Strategy for Future Research Activity

これまでにTSWV複製への関与が確認できた8遺伝子を中心に、変異株におけるウイルスタンパク質の局在やRNP形成能の有無等を調べることにより、各遺伝子の機能の解明を試みる。