2020 Fiscal Year Annual Research Report
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19H03054
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| Research Institution | Fukui Prefectural University |
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Principal Investigator |
末武 弘章 福井県立大学, 海洋生物資源学部, 教授 (00334326)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
瀧澤 文雄 福井県立大学, 海洋生物資源学部, 准教授 (60822913)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 免疫 / ワクチン / リンパ組織 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
魚類の主要な抗体であるIgMおよびIgM+B細胞の機能を解析するためにゼブラフィッシュの主要な抗体であるIgMに対する抗体の作製に取り組んだ。クローニングしたゼブラフィッシュIgM遺伝子のうち、膜型IgMと分泌型IgMの両方を認識可能な定常領域部を標的抗原となるようにマウスFc融合タンパク発現ベクターに組み込み、哺乳類細胞に導入し、リコンビナントタンパク質を作製した。昨年度作出したメダカIgM抗体は抗原とした組み換えタンパク質に対しては反応を示すものの、メダカの実際のIgMには反応を検出することができなかったため、今後の検討が必要である。
魚類の抗原保持の場であるメラノマクロファージを構成する褐色あるいは黒色の細胞はメラノマクロファージ（MM）と呼ばれており、傷ついた赤血球の貪食と鉄の再利用に関わると考えられている。MMは広い範囲の自家蛍光を持つことから、この性質を利用して、セルソーターを用いて、末梢血白血球では見られない強い蛍光を持つ細胞を脾臓や腎臓といった二次リンパ組織から単離することができた。この自家蛍光細胞は光学顕微鏡による観察から、組織内のMMと酷似した形態を示すこと、ベルリンブルー染色により鉄を保持していること、鉄代謝に関わる遺伝子を発現していることが確認できたことから、MMを単離することに成功したと判断した。また、蛍光抗原の投与後、セルソーターを用いて、脾臓のエリプソイドにおける抗原捕捉細胞の単離に成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ゼブラフィッシュ抗IgM抗体の作出に成功し、抗体産生細胞の同定が可能になった。また、抗体価の測定も可能になると期待できる。
魚類の二次リンパ組織に存在する長期的な抗原保持細胞であるメラノマクロファージの単離に成功した。これにより、細胞の性状が明らかになることが期待される。また、抗原投与初期に抗原を捕捉する細胞の単離にも成功し、免疫記憶形成に関わると考えられる複数の細胞の解析が可能になった。
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| Strategy for Future Research Activity |
作出した組み換えゼブラフィッシュIgMを用いてゼブラフィッシュIgM特異的抗体を作出し、ゼブラフィッシュの主要な抗体であるIgM産生B細胞の性状解析を行う。また、単離可能になった抗原捕捉細胞の性状を捉え、免疫応答、免疫記憶形成に関わる作用を明らかにする。
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