2019 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of commonalities and specificities in genomic imprinting inheritance by novel mechanisms
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19H03134
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
谷本 啓司 筑波大学, 生命環境系, 教授 (90261776)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | ゲノム刷り込み / 遺伝子改変マウス / 制御分子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々はこれまでに、多数の遺伝子改変マウス系統を作製・解析することで、同現象に必須のH19-ICR内cis配列を118-bpにまで絞り込んできた。本配列に結合するタンパク質性因子を同定し、そのin vivoでの機能検証をおこなうことで、新規エピジェネティック遺伝様式の分子基盤を明らかにすることが、本研究の目的の一つである。また、ヒトのH19-ICRや、他のDMRのメチル化制御機構との共通性と特異性を明らかにすることで、ヒト・ゲノム刷り込み疾患の発症機序や高品質な幹細胞の要件の理解を深めたい。
2019年度は、ゲノム刷り込み制御の基盤である片アリル性DNAメチル化に関わる新規タンパク質因子の同定を目指し、以下の実験を行った。（1）刷り込みメチル化制御因子は、精子や初期胚に存在することが考えられる。野性型と変異型のH19-ICR配列を蛍光標識プローブとし、ES/精巣核抽出液でゲルシフトアッセイをおこなった。シフトバンドの抽出後、質量分析による分子同定を試みたが、サンプルの精製度が低かったためか、分子同定には至らなかった。（2）HA-FLAGタグを付加した切断活性欠損型Cas9(dCas9)を、guide RNAを介してH19-ICR領域へとリクルートするES細胞株から、マウス系棟の樹立に成功したが、新型コロナウィルスの影響で、一時、実験を中断している。（3）生化学的精製とデータベースからの探索の両手法により、複数のH19-ICR候補因子を同定した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
予定した計画がうまくいかなかった場合も想定して実験計画をたてているため、全体としては順調に進展している。新型コロナウィルスの影響でマウスの維持が困難となっているため、今後、研究の進捗に影響が出る可能性がある。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究計画の変更はないが、大がかりな動物実験の遂行は難しくなるかもしれない。状況が長期化するようであれば、分子生物学・生化学実験を先行して進める等、計画の一部修正が必要になる。
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