2019 Fiscal Year Annual Research Report
PMQCにおけるユビキチン化制御分子の機能解明と治療的応用
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19H03185
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| Research Institution | Kwansei Gakuin University |
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Principal Investigator |
沖米田 司 関西学院大学, 理工学部, 教授 (90398248)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中村 照也 熊本大学, 大学院先導機構, 准教授 (40433015)
高橋 宏隆 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 講師 (70432804)
石黒 洋 名古屋大学, 総合保健体育科学センター, 教授 (90303651)
福田 亮介 関西学院大学, 理工学部, 助教 (90825308)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | ユビキチンリガーゼ / タンパク質品質管理 / CFTR |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. PMQC E3 リガーゼの異常 CFTR 認識機構の解析：RFFL, HECT-E3 において，相互作用解析により CFTR 認識に関与する領域を見出した．LON-E3に関しては，E3 活性に関わる機能領域を見出した．HECT-E3において，AlphaLISAによる in vitro 結合評価系は確立できなかったが，NanoBiT法による細胞内相互作用評価系は確立できた．
2. siRNA スクリーニングによる PMQC DUB の同定: CFBE細胞において，WT CFTR, DF508 CFTR の形質膜レベルを指標にDUB siRNA スクリーニングを行った．その結果、選択的作用及び非選択的作用を持つDUB候補分子を得た．また，DUB過剰発現による影響解析も行なった結果，同様に選択的作用及び非選択的作用を持つDUB候補分子を得た．
3. CF-HBE CFTR 活性評価法の確立：CF 治療薬の前臨床試験最終評価系である CF 患者気道上皮初代培養細胞（CF-HBE）におけるCFTR機能評価測定法を確立した．CFモデルマウスも入手した．
4. PMQC E3 リガーゼの構造解析：E3 リガーゼ HECT-E3 精製タンパク質を十分量精製することができなかった．代理として，E3 リガーゼ RNF5, RNF185 の精製タンパク質の準備を進めた．予備実験検討の結果，両タンパク質ともに高い収量を得ることに成功した．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
PMQC E3 リガーゼ HECT-E3 の構造解析は十分な精製タンパク質の確保が困難であったため，進展していないが，他の研究計画に関しては，概ね順調に進んでいる．DUB スクリーニングに関しては，siRNA スクリーニングに加えて，過剰発現実験によるスクリーニングも終了することができた．
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| Strategy for Future Research Activity |
PMQC E3 リガーゼ HECT-E3 の構造解析は困難であったため，他の重要な E3 リガーゼ RNF5, RNF185 の構造解析を進める．他の計画に関しては，計画通りに進める．
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Research Products
(9 results)
