2020 Fiscal Year Annual Research Report
Creation of antibody specific nucleic acid aptamers and their application to bio- process- and clinical analyses
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19H03360
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| Research Institution | University of Shizuoka |
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Principal Investigator |
轟木 堅一郎 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (70341451)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 秀樹 岐阜薬科大学, 薬学部, 准教授 (00419665)
橋本 博 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (40336590)
池袋 一典 東京農工大学, 工学(系)研究科(研究院), 卓越教授 (70251494)
鈴木 昭夫 岐阜大学, 医学部附属病院, 准教授 (80775148)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 抗体医薬分析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度に探索したトラスツズマブ、インフリキシマブ、ニボルマブに加え、本年度は新たにトシリズマブやリツキシマブに対するアプタマーを探索した。その際、タンパク質精製用LCと超大量DNAを用いたアプタマー候補DNAの簡便かつ迅速な探索法を構築した。本法は大量のDNAを必要とするものの従来のSELEX法のように実施者の技量に依存しない汎用性の高い方法である。その後、次世代シークエンス解析により得られた数万種類の配列の中からDNA解析用プログラムや二次構造予測ツール（mfold）などを駆使し，スクリーニング用の数十配列に候補を絞りこむことができた。これらの配列に対し、申請者らが確立したドットブロット法やELAA法、QCMによる解析を行い、解離定数が10-500 nM程度のアプタマーを複数獲得できた。これらについては、臨床分析に用いるべくELAA法のバリデーションを実施中である。また、これらのアプタマーについては、対象医薬との複合体形成による結合様式解明や、アプタマーの修飾（塩基置換，リンカー付与、３本鎖形成など）による親和性向上を図る。
また、別のクリニカルアナリシス法として、昨年度検討途中であったベバシズマブアプタマーを用いる血中薬物濃度簡易測定用イムノクロマトグラフィーキットの開発に成功した。
さらに、磁気ビーズによるアフィニティー精製と、遠心濾過デバイスによる試料濃縮、トリプシン固定化モノリスシリカスピンカラムを組み合わせたベバシズマブのLC-MS/MSでの高精度な定量法を構築できた。
最終年度の臨床多検体分析に向け、共同研究先の医療機関による倫理審査を終え、各種抗体医薬投与患者血液試料の採取を開始しており、分析バリデーションを終えた分析法から順次分析に投入していく。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
新型コロナウイルス感染拡大の影響により、研究活動が一定期間制限されたことや、関連試薬の調達遅れや受託解析の納品が遅延したことが主因である。
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| Strategy for Future Research Activity |
2020年度までの研究成果により、予定していた全ての抗体医薬製剤において候補アプタマーを得ることができた。また、バイオアナリシス、クリニカルアナリシス法についても基礎的な検討は終え方法論自体の構築は終えることができた。最終年度は、これらの成果を論文成果として公表することや、実検体分析に向けたバリデーションの構築と、患者検体の分析と評価を中心に精力的に推進していく。
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Research Products
(13 results)
