2021 Fiscal Year Annual Research Report
Creation of antibody specific nucleic acid aptamers and their application to bio- process- and clinical analyses
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19H03360
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| Research Institution | University of Shizuoka |
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Principal Investigator |
轟木 堅一郎 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (70341451)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
林 秀樹 岐阜薬科大学, 薬学部, 教授 (00419665)
橋本 博 静岡県立大学, 薬学部, 教授 (40336590)
池袋 一典 東京農工大学, 工学(系)研究科(研究院), 卓越教授 (70251494)
鈴木 昭夫 岐阜大学, 医学部附属病院, 准教授 (80775148)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 抗体医薬分析 / DNAアプタマー / バイオアナリシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度に引き続き市販抗体医薬および抗体薬物複合体に対する抗イディオタイプDNAアプタマーの探索を行い、抗体医薬7種（trastuzumab、infliximab、nivolumab、tocilizumab、rituximab、ramucirumab）およびADC1種（trastuzumab emtansine）に対するアプタマーを構築したSELEX法および後述する新規探索法により獲得した。これらの配列はいずれも解離定数が10-200 nM程度と一部は改良の余地があるものの、標的医薬に対して高い親和性を有していた。また、これら配列は、in silicoドッキングシミュレーションの結果から、いずれも可変部に結合することが示唆されその高い特異性が示唆された。これらを捕捉分子とする多検体血中薬物濃度分析法（ELAA法）およびその改良法への適用と分析バリデーションを行い、nivolumabを始めとするがんおよび関節リウマチ患者の血漿試料分析を進めている。
また、昨年度より開始した、タンパク質精製用LCと超大量DNAを用いたアプタマー候補DNAの簡便かつ迅速な探索法をアップデートし、次世代シークエンス解析により得られた数万種類の配列からの候補配列を絞り込むためのアルゴリズム（Smart Aptamerなど）の利用、候補配列の抗イディオタイプ性の評価や、配列改善の指針を得るためのin silico解析フォーマット（H-DOCKなど）の整備を行い、今後、更なる対象抗体医薬の拡大や、自己抗体、疾患関連タンパクに対する特異性の高いDNAアプタマーの獲得に繋がる知見や技術的ノウハウを得ることができた。
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| Research Progress Status |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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