2019 Fiscal Year Annual Research Report
Homeostasis of the epidermal cells and its dysfunction in epidermolysis bullosa
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19H03449
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
泉 哲郎 群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (00212952)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松永 耕一 群馬大学, 生体調節研究所, 助教 (20570162)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 細胞移動 / 細胞接着 / Rab27 / インテグリン / タンパク質複合体 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Exophilin-5は、その遺伝子変異が表皮水疱症を引き起こすことが報告されているが、その具体的な機能、作用機序はほとんどわかっていない。これらを解明するため、これまでに以下の実験を行った。
まずヒト表皮培養細胞株HaCaTを、インサート入りディッシュに培養し、インサート除去後の細胞間隙を遊走細胞が埋めるまでの経過を観察する創傷治癒アッセイを行ったところ、Exophilin-5をノックダウンした細胞では、予想と反し、細胞間隙を埋める過程が早まるという知見を得た。次に表皮での細胞外マトリックス、ラミニン３３２をコートしたディッシュにこの細胞を撒き、一定時間後に洗浄し、ディッシュに張り付いて残っている細胞数を計測する細胞接着アッセイを行ったところ、ノックダウン細胞では、細胞接着性が有意に減少していた。また、インテグリンの細胞内局在を観察したところ、ノックダウン細胞では、インテグリンの細胞膜局在が阻害され、細胞内部の小胞に蓄積されることを見い出した。以上のことから、Exophilin-5は表皮細胞の遊走、接着能に重要な働きを有していることが考えられた。
また、巨大タンパク質であるExophilin-5は、様々なタンパク質と相互作用する足場タンパク質として機能している可能性がある。そこでプルダウン法を用い、新規Exophilin-5結合タンパク質探索を試みたところ、細胞遊走や接着に関わる、細胞骨格系を制御するタンパク質がいくつか同定された。現在、この相互作用について解析を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
Exophilin-5ノックダウンによる創傷治癒アッセイの結果が、予想と反対であり、その表現型の確認に時間を取った。また、Exophilin-5と相互作用するタンパク質の解析がやや遅れている、その原因として、Exophilin-5が2000アミノ酸からなる巨大分子で、細胞系における発現レベルが低く、同定した候補タンパク質が、stoichimetricに、真の相互タンパク質かどうかを確認するための作業に時間を取っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
外来性Exophilin-5の発現レベルを上げることに関しては、アデノウィルス、レンチウィルスなど、複数の発現系を試している。すでに同定した候補タンパク質については、免疫沈降法による結合の確認、リコンビナント・タンパク質を用いた結合領域の決定、ノックダウンによる細胞レベルでの表現型解析を推進する。
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[Journal Article] Exophilin-5 regulates allergic airway inflammation by controlling IL-33-mediated Th2 responses.2020
Author(s)
Okunishi K, Wang H, Suzukawa M, Ishizaki R, Kobayashi E, Kihara M, Abe T, Miyazaki J, Horie M, Saito A, Saito H, Nakae S, and Izumi T.
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Journal Title
J. Clin. Invest.
Volume: in press
Pages: -
Peer Reviewed
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[Journal Article] Coixol amplifies glucose-stimulated insulin secretion via cAMP mediated signaling pathway.2019
Author(s)
Hameed A, Hafizur RM, Kahn MI, Jawed A, Wang H, Zhao M, Matsunaga K, Izumi T, Siddiqui S, Khan F, Adhikari A, and Sharma KR.
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Journal Title
Eur. J. Pharmacol.
Volume: 858
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Presentation] Coixol amplifies glucose stimulated insulin secretion through cAMP-PKA signaling cascade-independent of K-ATP Channels.2019
Author(s)
Abdul Hameed, Rahman M Hafizur, M Israr Khan, Hao Wang, Miaomiao Zhao, Kohichi Matsunaga, Tetsuro Izumi, Sonia Siddiqui, Faisal Khan, Achyut Adhikari, and Khaga Raj Sharma.
Organizer
The 11th Scientific Meeting of the Asian Association for the Study of Diabetes.
Int'l Joint Research
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[Presentation] Hymecromone potentiates glucose-stimulated insulin secretion through cAMP-PKA signaling pathway.2019
Author(s)
Rahman M Hafizur, M Israr Khan, Abdul Hameed, Kiran Maryam, Huma Aslam Bhatti, Munneb Ali, Zaheer-UI, Faisal Khan, Ghulam Abbas, Hao Wang, Kohichi Matsunaga, and Tetsuro Izumi
Organizer
第62回日本糖尿病学会年次学術集会
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[Presentation] Exploring the insulin secretory mechanisms of hymecromone and eupatorin in mice islets.2019
Author(s)
Rahman M Hafizur, Abdul Hameed, M Israr Khan, Kiran Maryam, Muneeb Ali, Za-heer Ul-Haq, Hao Wang, Miaomiao Zhao, Kohichi Matsunaga, Tetsuro Izumi, Achyut Adhi-kari, Huma Aslam Bhatti.
Organizer
The 7th International Symposium-cum-Training Course on Molecular Medicine and Drug Research, Karachi, Pakistan
Int'l Joint Research
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