2019 Fiscal Year Annual Research Report
神経芽腫モデルマウスを用いたGD2抗体発現間葉系幹細胞による新規細胞免疫療法開発
| Project/Area Number |
19H03719
|
|---|
| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
|---|
Principal Investigator |
田尻 達郎 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80304806)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
松田 修 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00271164)
岸田 綱郎 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (00370205)
東 真弓 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10380453)
文野 誠久 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40405254)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | 癌 / 神経芽腫 / 間葉系幹細胞 / 免疫療法 / 抗GD2抗体 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
ハイリスク神経芽腫に対する新規治療法として,マウスモデルに対する,間葉系幹細胞(MSC)によるhoming効果と,抗GD2抗体を用いた免疫療法を組み合わせたGD2-MSCsによる新規細胞免疫療法の開発を目的とする.将来的には,GMP準拠医薬品として製造し,医師主導治験を経てハイリスク神経芽腫に対する地固め療法としての臨床導入を目指す.
具体的には，神経芽腫の臨床試験で用いられている抗GD2抗体,IL-2,GM-CSFを組み込んだベクターをマウスMSCに導入させ,転移モデルを含む各種神経芽腫モデルマウスに対して腫瘍特異的に抗GD2抗体を作用させることにより,神経芽腫特異的抗腫瘍免疫を活性化させる予定であったが，導入する遺伝子が大きいことによる発現量の不安定性や細胞の変異の可能性を考慮し，マウスMSCには抗GD2抗体を発現する遺伝子とマーカーのみを組み込み，IL-2およびGM-CSFはGD2-MSCsと同時投与とする方針とした．
現時点では導入するDNA plasmidを作成しレンチウイルスシステムによりマウスMSCに抗GD2抗体発現遺伝子を導入し終えた段階である．作成したplasmidにはピューロマイシン耐性遺伝子を含んでおり,現在細胞のselectionを行っている．また,in vitroで抗体の機能を確認する目的でいくつかの神経芽腫細胞株との共培養を行う予定であるため,フローサイトにて各細胞株のGD2やMHCclassⅠなどの発現を確認している．
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
一つのpromoterで抗GD2抗体（14.G2a）をGFPと同時に発現するplasmidをMSCに導入することで遺伝子発現を蛍光顕微鏡にて視覚的に確認することを検討していた．しかしMSCの元来の導入効率の低さと,発現する遺伝子の大きさ（bp）が大きいことによる導入効率の低下が障壁となり,十分な抗体発現量を持つ細胞を作成できなかった．そのため,promoterの再検討と,それに続く配列を14.G2a発現遺伝子とマーカーのFLAGのみにしぼったplasmidの再構築を行う必要があり,これらに時間を要した．
|
| Strategy for Future Research Activity |
MSC へのベクターの導入が完了した後，GD2-MSC培養液中に産生される抗 GD2 抗体を ELISA 法により測定する．また神経芽腫細胞とGD2-MSCsとの共培養にて抗体の機能を確認する予定である．
in vitroで抗体の発現と機能が確認された後,GD2-MSCsのMYCN-TgM 腫瘍への集積および免疫賦活化の解析をin vivoで行う．GD2-MSCsに蛍光色素をコーティングし，IVIS（生体内イメージングシステム）により発光標識可能とする．生後5週齢homoのMYCN-TgMを5匹作成し，GD2-MSCs（細胞数1.0×10^6個）をPBSで懸濁した細胞溶解液を腹腔内投与し，IVISで24時間追跡し，生体内動態について解析を行う．24時間後マウスを犠牲死させ腫瘍および他臓器を摘出し，腫瘍または臓器ごとにIVISで撮影を行う．また腫瘍内における抗GD2抗体の測定を行う．さらに腫瘍内および血中のNKおよびT-cellの細胞障害活性，マクロファージの貪食能活性の測定を行う．抗腫瘍抗果を判定するためにGD2-MSCsとIL-2，GM-CSFを１週間に一度投与して生存曲線を評価する．
|
Research Products
(33 results)
-
-
-
-
-
-
-
-
-
[Journal Article] Japanese Clinical Practice Guidelines for Sacrococcygeal Teratoma, 20172019
Author(s)
Fumino S, Tajiri T, Usui N, Tamura M, Sago H, Ono S, Nosaka S, Yoneda A, Souzaki R, Higashi M, Sakai K, Takahashi K, Sugiura T, Taguchi T
-
Journal Title
Pediatrics International
Volume: 61
Pages: 672-678
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] Efficacy and safety of sirolimus treatment for intractable lymphatic anomalies: A study protocol for an open-label, single-arm, multicenter, prospective study (SILA)2019
Author(s)
Ozeki M, Asada R, Saito AM, Hashimoto H, Fujimura T, Kuroda T, Ueno S, Watanabe S, Nosaka S, Miyasaka M, Umezawa A, Matsuoka K, Maekawa T, Yamada Y, Fujino A, Hirakawa S, Furukawa T, Tajiri T, Kinoshita Y, Souzaki R, Fukao T
-
Journal Title
Regen Ther
Volume: 10
Pages: 84-91
DOI
Peer Reviewed / Open Access
-
[Journal Article] Results of a prospective clinical trial JN-L-10 using image-defined risk factors to inform surgical decisions for children with low-risk neuroblastoma disease: A report from the Japan Children’s Cancer Group Neuroblastoma Committee2019
Author(s)
Iehara T, Yoneda A, Yokota I, Takahashi H, Teramukai S, Kamijyo T, Nakazawa A, Takimoto T, Kikuta A, Yagyu S, Ikeda H, Nakagawara A, Tajiri T
-
Journal Title
Pediatr Blood Cancer
Volume: 66
Pages: e27914
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
[Journal Article] Enhanced metastatic growth after local tumor resection in the presence of synchronous metastasis in a mouse allograft model of neuroblastoma2019
Author(s)
Inoue M, Tsuchiya Y, Koike N, Umemura Y, Inokawa H, Togashi Y, Maniwa J, Higashi M, Fumino S, Tajiri T, Yagita K
-
Journal Title
Pediatric Surgery International
Volume: 35
Pages: 1403-1411
DOI
Peer Reviewed
-
-
[Journal Article] Immunologic effects of sirolimus in patients with vascular anomalies2019
Author(s)
Nozawa A, Ozeki M, Yasue S, Endo S, Kawamoto N, Ohnishi H, Fumino S, Furukawa T, Tajiri T, Maekawa T, Fujino A, Souzaki R, Fukao T
-
Journal Title
J Pediatr Hematol Oncol
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
[Presentation] 神経芽腫マウスにおける神経芽腫選択的な新規間葉系幹細胞デリバリーシステム2019
Author(s)
Maniwa J, Fimino S, Kimura K, Tanaka T, Higashi M, Sakai K, Aoi S, Furukawa T, Kishida T, Mazda O, Tajiri T
Organizer
第57回日本癌治療学会学術集会
-
-
-
