non coding RNA吸着性環状RNAの癌増殖浸潤転移における役割の解明

2019 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19H03847
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 笠松 厚志 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (60375730)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中嶋 大 千葉大学, 大学院医学研究院, 助教 (50431747) ; 坂本 洋右 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (50451745) ; 丹沢 秀樹 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (50236775)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: 口腔癌 / non codingRNA / circRNA / miRNA / CircRNA Array

Outline of Annual Research Achievements

本研究では① 口腔癌細胞株(OSCCs)における特異的circRNAの同定とそれらの発現状況を確認し、それに吸着されて機能を抑制されるmiRNA、long non coding RNA の存在を明らかにする。② 同定された口腔癌特異的circRNA を人工的に合成し口腔癌細胞株に導入することで、miRNA やlong non coding RNA の発現の変動を確認し、miRNA やlong non coding RNA の発現の変動に伴う口腔癌細胞の細胞増殖能・浸潤能・遊走能の変化を確認する。③ 同定された癌抑制circRNA について、それらの核酸医薬としての有効性を検討する事を目標としている。以下に本年度の成果を示す。
1． ヒト正常口腔粘膜上皮細胞(HNOKs)とOSCCsよりtotal RNAを抽出し、包括的circRNAに
特化したcircRNA Arrayによる発現解析を行い、ヒト正常口腔粘膜上皮細胞と比較して、口腔癌細胞株において有意に発現低下しているcircRNAを同定した。
2． 同定したcircRNAのOSCCsでの発現状況を調べるため、circRNAに対する特異的プライマーをデザインし、定量的(qRT-PCR) 法にて確認した。
３.　同定したcircRNAと吸着が予想されるmiRNAを同定し、OSCCsにおける発現状態を確認した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ルシフェラーゼアッセイにて直接的なcircRNAとmiRNAの結合は確認できていないが、circRNA,miRNAの OSCCsにおける発現状態は確認できている。

Strategy for Future Research Activity

circＲＮＡの人工合成は難しいため、ベクター導入にて同定したcircＲＮＡを過剰発現させて、口腔癌細胞の細胞増殖能・浸潤能・遊走能の変化を確認する予定である。