2021 Fiscal Year Annual Research Report
ヌクレオチド除去修復機構解明に向けたケミカルアプローチ
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19H04265
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
松永 司 金沢大学, 薬学系, 教授 (60192340)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
若杉 光生 金沢大学, 薬学系, 准教授 (80345595)
後藤 享子 金沢大学, 薬学系, 准教授 (50180245)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | ヌクレオチド除去修復 / ケミカルバイオロジー / 阻害剤 / 低分子化合物 / 近位依存性ビオチン標識法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、ヌクレオチド除去修復（nucleotide excision repair; NER）のより高次な調節機構の解明に向けて、ケミカルバイオロジーを利用した２つのアプローチから研究を進めている。今年度は、従来からのフォワードケミカルジェノミクスのアプローチを進展させるとともに、昨年度までに導入した近位依存性ビオチン標識法（BioID法）を用いてNER中間複合体の単離を試み、以下の実績を得た。
（１）フォワードケミカルジェノミクスのアプローチ
先行する低分子化合物A6のERCC1分解誘導メカニズムに関して、A6処理後にERCC1のポリユビキチン化体が生じること、この反応は以前に同定したE3リガーゼの活性化阻害剤や基質受容体siRNAの処理により顕著に抑制されることを明らかにした。また、ERCC1-EGFP融合タンパク質の安定発現細胞株を用いて、A6処理後にGFP-Trapで基質受容体が共沈降されることを見出した。一方、パツリンとシコニンに関しては、昨年度明らかにしたXPCとTFIIHサブユニットp62との相互作用の増強が、両者の相互作用に重要なXPCの酸性領域（acidic string）を介したものであることがわかった。
（２）BioID法を利用したアプローチ
NER必須因子のXPAまたはXPCにTurboIDを融合させたタンパク質を安定発現する細胞株に紫外線照射し、ビオチン添加して標識されるタンパク質をウエスタンブロッティング及びMS解析で同定したところ、いずれの細胞株でもTHIIHのサブユニットが再現的に検出され、このビオチン化はXPBのATPase阻害剤triptolideの処理で著しく減少し、逆に上述のA6処理で増加したことから、NERに依存した反応であることがわかった。また、MS解析ではこれまでNERへの関与が知られていない複数のタンパク質が検出された。
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| Research Progress Status |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和3年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] Camptothecin compromises transcription recovery and cell survival against cisplatin and ultraviolet irradiation regardless of transcription-coupled nucleotide excision repair2022
Author(s)
Sakasai, R., Wakasugi, M., Matsui, T., Sunatani, Y., Saijo, M., Matsunaga, T. and Iwabuchi, K.
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Journal Title
DNA Repair
Volume: In press
Pages: 未定
DOI
Peer Reviewed
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