2019 Fiscal Year Annual Research Report
創薬にむけた膵癌の進展過程におけるクロマチンリモデリング因子BRG1の役割の解明
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19J01318
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| Research Institution | Kindai University |
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Principal Investigator |
津田 喬之 近畿大学, 医学研究科, 特別研究員(PD)
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| Project Period (FY) |
2019-04-25 – 2022-03-31
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| Keywords | 膵癌 / エピジェネティクス / SWI/SNF / BRG1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者は、SWI/SNFクロマチンリモデリングコンプレックスの主要構成分子Brg1が、膵癌においてどのような役割を果たすかにつきin vivoで検討し、創薬につなげることを目的としている。
本年度は、PanINを自然発症し、かつ任意の時期にタモキシフェン投与によりBrg1を欠失させることができるPdx1-Flp; FSF-KrasG12D; FSF-Rosa26CreERT2; Brg1f/f マウスを作成し、PanINが形成された後にBrg1を欠失させ、PanINの維持、進行におけるBrg1の役割を評価した。タモキシフェン投与後2週間、2カ月の時点においていずれも、Brg1欠失群においてPanINの数が1/8程度まで減少していた。さらに、Brg1欠失群において残存していたPanINの80％程度はBrg1免疫染色陽性で、Brg1の欠失を免れたエスケーパーであることが明らかになった。さらに、タモキシフェン投与後3日のマウスの膵組織においてCleaved Caspase3染色を行ったところ、Brg1欠失群においてアポトーシスが有意に増加していることがわかった。
上記実験により、Brg1はアポトーシスの制御を介しPanINの維持・進行に必須であることが明らかになった。
次いで膵癌形成後のBrg1の役割を明らかにするため、膵癌を形成し、かつ任意の時期にBrg1を欠失させることができるPdx1-Flp; FSF-KrasG12D; Trp53+/-; FSF-Rosa26CreERT2; Brg1f/f マウスを作成した。同マウスに膵癌が形成された後にBrg1を欠失させ、同一マウス個体内でBrg1の欠失前後での腫瘍径の変化を経時的に評価中である。
また、ヒト膵癌細胞株においてBrg1をsiRNA/shRNAをもちいてノックダウンすることに成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
すでに膵前癌病変PanINを自然発症するマウスモデルで、PanINを形成後にBrg1を欠失させることにより、Brg1がPanINの維持に必須であることを見出している。さらに、膵癌を自然発症するマウスモデルで膵癌が形成された後にBrg1を欠失させる実験も開始している。また、ヒトへの応用を目標に、ヒト膵癌株においても、shRNAを用いたBrg1のノックダウン実験を開始しており、すでに効率的なノックダウンクローンを作成済みである。これらの進捗状況はおおむね研究計画書通りであり、順調に進捗しているといえる。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度は、本年度確立したマウスモデルを用い、膵癌におけるBrg1の果たす役割をin vivoで評価する。マウス膵癌におけるBrg1の役割をより詳細に検討するために、Brg1を欠失させる前のマウス膵癌から細胞株/オルガノイドを作成し、浸潤能、転移能などを詳細に評価する予定である。また、Brg1欠失前後の網羅的遺伝子発現解析を行い、Brg1欠失によりどのようなpathwayに変化を生じることによりphenotypeが形成されるのかを明らかにする。また、すでに樹立したBRG1ノックダウンヒト膵癌株を用いて、ヒト膵癌においてBrg1が果たす役割がマウス膵癌と同様であるかを評価する。さらに、合成致死性の概念を用いたBrg1ノックアウト/ノックダウン膵癌に特異的な治療標的についても検討していく。
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Research Products
(3 results)
