2019 Fiscal Year Annual Research Report
Mechanism of DNA repair dysfunction in Alzheimer's disease
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19J10924
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
栗原 正典 東京大学, 大学院医学系研究科, 特別研究員(DC2)
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| Project Period (FY) |
2019-04-25 – 2021-03-31
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| Keywords | アルツハイマー病 / タウオパチー / BRCA1 / タウ / tau / Pick病 / 進行性核上性麻痺 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度はアルツハイマー病におけるDNA修復機構破綻の重要な原因であるBRCA1とタウの共凝集について，①細胞系を用いたBRCA1側の凝集に重要な部位の検討，②剖検脳を用いたタウ側の要素の検討，③共凝集に重要な他の因子の探索のためのスクリーニング系の検討を行なった。
① 蛍光タンパクをタグ付けした野生型およびN末端側のRINGドメイン，中央部位，C末端側のBRCTドメインをそれぞれ欠失した変異体BRCA1プラスミドを作成し，タウ凝集誘導時の共凝集の有無を検討し，BRCA1の凝集に必要な部位の同定を行なった。
② アルツハイマー病以外のタウオパチー剖検脳においてBRCA1がタウとともに凝集しているかを検討し，Pick病および進行性核上性麻痺脳においてもBRCA1はタウと凝集していることを確認し，国内・国際学会および英文誌への発表を行なった。アルツハイマー病とはタウのアイソフォームや凝集体の構造の異なるこれらのタウオパチーにおいてもBRCA1とタウの凝集が生じていることから，タウに関してはアイソフォームや凝集体の構造によらずBRCA1の共凝集を生じることが示唆された。
③ BRCA1とタウが近接した場合に蛍光を認めるように二分子蛍光相補（BiFC）プラスミドを作成，一過性過剰発現系でタウ凝集シードを加えて共凝集を誘導した場合のみ蛍光値が上昇することを確認し，スクリーニング系として機能しうることを確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
スクリーニング系の準備には時間を要し本年度中に本実験まで行なえなかったが，
BRCA1・tauそれぞれについて共凝集について新たな知見を得ることができた。またスクリーニング実験のための薬剤・化合物ライブラリーについては公共プラットフォームの実務担当者と面談を本年度行ない，支援を受けられる予定となった。
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| Strategy for Future Research Activity |
BRCA1側の凝集に重要な部位については本年度得られた結果をもとにさらに小さな欠失変異体プラスミドを作成し，凝集に十分な最小限の構造の同定を進める。また剖検脳から明らかになった凝集BRCA1リン酸化部位について点変異プラスミドを作成し，同部位のリン酸化の凝集への影響を検討する。
共凝集に重要な他の因子の探索のためのスクリーニング系については安定したスクリーニング実験のためにBiFCプラスミドを同時安定発現するシングルクローン細胞作成を行なう。
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