2021 Fiscal Year Annual Research Report
プロドラッグ型siRNAを用いたホモ接合体家族性高コレステロール血症治療薬の開発
| Project/Area Number |
19K05702
|
|---|
| Research Institution | Osaka Medical and Pharmaceutical University |
|---|
Principal Investigator |
浦田 秀仁 大阪医科薬科大学, 薬学部, 教授 (80211085)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
斯波 真理子 国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 研究所, 非常勤研究員 (70271575)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | 核酸医薬 / siRNA / プロドラッグ型核酸 / 還元環境応答型 / ホモ接合体家族性高コレステロール血症 / Apolipoprotein B |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
ホモ接合体家族性高コレステロール血症 (FH)の治療標的となるApoB mRNAに対するsiRNAを、ヒト肝がん由来細胞である HuH-7細胞にCEM (Ca2+ enrichment of medium) 法でトランスフェクションするin vitro評価系を確立した。次に、ApoB-siRNAを代表者が開発したプロドラッグ型のREDUCT修飾を行うにあたり、REDUCT修飾技術の限界から、血清中での分解hotspotを同定した上で、従来型の非プロドラッグ型修飾によりsiRNA活性が低下する部位にのみREDUCT修飾を用いる設計戦略から下記検討を行った。
１） 従来型非プロドラッグ型修飾として汎用されている2'-O-methyl基でアンチセンス鎖を部分的に修飾した16種類のApoB-siRNAを網羅的に合成し、それぞれを上述のin vitroの評価系に付し、従来型修飾でsiRNA活性が低下する3つの領域を確定することに成功した。
２）血漿中のヌクレアーゼにより分解を受けやすい箇所を同定するために、アンチセンス鎖の5'-, 3'-いずれかの末端を蛍光標識したApoB-siRNAを用いて、分解反応を種々検討した結果、endonucleaseによる分解hotspotを３箇所同定することができた。
次に、１）および２）の結果に基づき数残基2'-O-Me修飾したアンチセンス鎖と、3'-末端に肝臓へのターゲッティングが可能になるGalNAc (N-アセチルガラクトサミン) 修飾を施したセンス鎖を合成し、FH病態モデルマウスを用いたin vivo実験を行ったが、ApoB mRNA発現量の低下は全く認められなかった。以上より、血清中での分解hotspotに限定して化学修飾する戦略ではsiRNAの十分な安定性が困難なことから、今後はREDUCT修飾を広範に行える技術の開発を進める予定である。
|
Research Products
(4 results)
