2021 Fiscal Year Annual Research Report
酵素学の観点からのケモエンザイマティック反応によるアミノ酸やペプチド合成法の開発
| Project/Area Number |
19K05775
|
|---|
| Research Institution | Ritsumeikan University |
|---|
Principal Investigator |
松井 大亮 立命館大学, 生命科学部, 助教 (40748513)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平田 佳之 大阪医科薬科大学, 薬学部, 助教 (00745854)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | ケト酸 / アミノ酸酸化酵素 / アミド化合物 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
1. 酵素反応によるケト酸合成：①L-アミノ酸からケト酸を生成するために、前年度取得したL-アミノ酸酸化酵素活性を示す微生物（糸状菌）の粗酵素液を用いて、部分精製を行い、特性解明を実施した。その酵素液を用いてケト酸合成を行った結果、20%程度の収率であった。収率を高めるために、糸状菌を含む様々なL-アミノ酸酸化酵素遺伝子を合成し、それらで基質転換した大腸菌を培養したが、高いアミノ酸酸化酵素活性を見出すことが出来なかった。②Pseudomonas putida由来低基質特異性アミノ酸ラセマーゼ遺伝子の大腸菌発現系を構築した。次いで、豚腎臓由来D-アミノ酸酸化酵素（pkDAO）をカップリングさせることで、L-アミノ酸からD-アミノ酸を介して、ケト酸を合成することに成功し、その収率は80%以上であった。③水層と有機層を二分するポリジメチルシロキサン膜を調製し、アミド化合物のワンポット合成も実施した。
2. アルドキシム還元酵素：データベースに登録されているイミン還元酵素の配列を用いて系統樹解析を行い、配列が異なる配列13種類を選抜し、それぞれの遺伝子の大腸菌発現系を構築した。その酵素を用いてアルドキシムの還元酵素活性を調べた結果、4種類から還元酵素活性を見出し、アルドキシムからヒドロキシルアミノ酸の合成に成功した。
3. 様々なアミド化合物の合成：phDAOとネイティブケミカルライゲーションによるアミド化合物の合成法を用いた多品種合成で、96穴プレート上でアミド化合物のライブラリーを確立した。得られたアミド化合物ライブラリーを用いて、ヒストン脱アセチル化酵素Iの阻害活性の迅速なスクリーニングを実施した。
|
