2021 Fiscal Year Research-status Report
がんにおけるジアシルグリセロールキナーゼの機能解明とその応用
| Project/Area Number |
19K05817
|
|---|
| Research Institution | Sapporo Medical University |
|---|
Principal Investigator |
甲斐 正広 札幌医科大学, 医学部, 講師 (80260777)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | ジアシルグリセロールキナーゼ / メラノーマ |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
我々はヒト悪性黒色腫(メラノーマ)におけるジアシルグリセロールキナーゼγ(DGKG)の機能について本研究で検討している。前年度までには、DGKGの不活性型ミュータント(KD, kinase-dead)あるいは常時活性化型ミュータント(CA, constitutively active)のどちらを発現してもメラノーマ細胞の遊走能や浸潤能が強く抑制されることを明らかにしていた。またマイクロアレイ解析を行い、DGKG-KDあるいはDGKG-CAを過剰発現したメラノーマ細胞では両者ともに、NFκBシグナリング経路を抑制するような方向で関連遺伝子群の発現に影響を与えていることを明らかにした。実際にNFKB1およびRelB遺伝子の発現はDGKG、特にCA型ミュータントの過剰発現によって有意に減少していることを確かめた。 そこで次にリポーターアッセイ法を用いて、実際にNFκBシグナリングにDGKGの発現が影響を与えるかどうかを検討した。リポーターベクターを導入したメラノーマ細胞に腫瘍壊死因子TNFα刺激を1時間与えてNFκBシグナリング経路を活性化させたところ、このNFκBシグナリング活性化はDGKG-CAの発現によって有意に抑制されることが示された。また野生型DGKGやDGKG-KDの発現によってもNFκBシグナリングは抑制される傾向が観察された。 さらにウェスタンブロット法を用いて、上記実験と同様にNFκBの活性化におけるDGKG発現の影響を観察した。TFNα刺激によるp65タンパク質(RelA)のリン酸化を観察したところ、リン酸化レベルがDGKG-CAの発現によって減少する傾向が示された。 以上の結果を合わせると、メラノーマではDGKGの発現によってNFκBシグナリングが抑制されることが示唆された。現在はNFκBシグナリング制御のメカニズムについてさらに詳細に検討している。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
大学の運営に関わる業務の増加により研究に割ける時間が減少しているため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
メラノーマ細胞株にDGKGを過剰発現してやるとNFκBシグナリングが抑制されることをこれまでに明らかにしてきたが、この結果が何を意味しているのかを明らかにすることを目的として研究を進めたい。幾つかのNFκB関連遺伝子、例えばp65やp50、あるいはIκBなどについて、その発現量やリン酸化などに着目することによって、DGKGがNFκBシグナリングにどのように関与しているかを解明する。そしてこれらの結果を持って論文を仕上げて早急に投稿を目指す。
|
| Causes of Carryover |
この２年間コロナ禍の到来により、思うように研究時間が取れずに研究計画が遅れ、それに伴い少しずつ執行予算が減少していた。特に細胞培養に欠かせないウシ胎児血清の購入を見込んで取り置いていた予算が丸々手付かずとなっているのが大きく、このようなケースが累積することにより予算の次年度使用額が生じた。最近は様々な研究資材の入手が滞ることも多く、これもまた研究の遅れや予算の執行遅れという結果となった。
本年度は納品に時間のかかる器具・薬品をまとめて購入することなどを考慮しつつ、研究目的を遂行できるよう適切に予算を使用したい。
|
Research Products
(1 results)
