2020 Fiscal Year Research-status Report
Analysis and application of carbohydrate binding specificity of oxidized LDL receptor
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19K05886
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| Research Institution | Meijo University |
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Principal Investigator |
氏田 稔 名城大学, 農学部, 教授 (50340295)
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2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | ヒト酸化LDL受容体 / 糖結合特異性 / グルカン / 組換えタンパク質 / 動脈硬化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
活性酸素などにより酸化されて生成する酸化低密度リポタンパク質（酸化LDL）はヒト動脈の内皮細胞表面に存在する酸化LDL受容体に特異的に認識され、内部に取り込まれる。その結果、動脈内壁に粥状（アテローム性）の隆起（プラーク）が形成され、アテローム性動脈硬化症が発症する。このヒト酸化LDL受容体とヒト酸化LDLの相互作用はアテローム性動脈硬化症の発症において最も重要なステップであるが、本受容体の結合特異性、特に酸化LDLと結合する細胞外レクチン様ドメインの糖結合特異性やヒト酸化LDLの結合部位は解析されていない。そこで本研究では、緑色蛍光タンパク質を付加した組換えヒト酸化LDL受容体を用いて糖鎖リガンドやヒト酸化LDLとの相互作用を解析することを目的として研究を行った。
N末端側にFLAGタグ、ヒスチジンタグ、AcGFP1を付加したヒト酸化LDL受容体の細胞外領域をカイコ－バキュロウイルス発現系で可溶性組換えタンパク質として大量調製し、アフィニティー精製を行った。二量体として発現していることをウェスタンブロット解析により確認した。
本組換えヒト酸化LDL受容体のグルカン結合特異性およびヒト酸化LDLとの相互作用をプルダウンアッセイにより解析し、ヒト酸化LDL受容体の細胞外レクチン様ドメインの詳細なグルカン結合特異性を解明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究では、緑色蛍光タンパク質を付加した組換えヒト酸化LDL受容体を大量生産し、そのグルカン結合特異性を詳細に解析するとともに糖鎖リガンドを同定することを目的としている。
本組換えヒト酸化LDL受容体の大量生産と精製は順調に進んでおり、プルダウンアッセイの条件検討も終了した。また、本組換えヒト酸化LDL受容体とヒト酸化LDLとの相互作用も確認することができている。
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| Strategy for Future Research Activity |
緑色蛍光タンパク質を付加した組換えヒト酸化LDL受容体とヒト酸化LDLの相互作用を解析するプルダウンアッセイを用いて、動脈硬化症に対する予防効果が報告されている食品中の各種β-グルカンをβ-グルカナーゼにより部分加水分解して可溶化したβ-グルカンオリゴ糖の結合阻害活性を解析する。本アッセイで明らかとなるβ-グルカンオリゴ糖－組換えヒト酸化LDL受容体間の相互作用のカイネティクスと、動脈硬化予防β-グルカンの効能との相関関係を確認・検証する。
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| Causes of Carryover |
当初の予定額よりも実際の購入金額が少し安くなったため。引き続き必要な試薬等の購入に充当していく。
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