2020 Fiscal Year Research-status Report
イヌの新規グルココルチコイド受容体スプライシングバリアントの探索と機能解析
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19K06412
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| Research Institution | Okayama University of Science |
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Principal Investigator |
松田 彬 岡山理科大学, 獣医学部, 講師 (90613969)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | グルココルチコイド / グルココルチコイド受容体 / 薬剤耐性 / スプライシングバリアント / イヌ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
グルココルチコイドは古くから使用されている薬剤で強力な抗炎症効果を持つが、長期間の使用では重大な副作用が発現するリスクがある。そのため、薬効を保ったままでの減薬を可能にする「グルココルチコイド感受性増強法」の開発が望まれている。グルココルチコイド受容体のスプライシングバリアント発現比は細胞のグルココルチコイド感受性に関与しており、ヒトでは少なくとも5種類のスプライシングバリアントが存在する。一方イヌではその存在は不明でるため、本研究ではその存在を検証し、その機能について検証することを目的とする。
本年度は昨年度までにクローニングを行った7種類の新規スプライシングバリアントについて、抗体によるタンパク検出系の確立を行うべく、COS-7細胞への遺伝子導入を行った後にウェスタンブロット法にて検出を試みた。その結果、スプライシングバリアントによって異なる分子量を示すバンドが検出された。このことは、各スプライシングバリアントによって異なる分子量のグルココルチコイド受容体がタンパクレベルで発現していることを示している。さらに、各種スプライシングバリアントを遺伝子導入することにより、レポーターアッセイにおけるグルココルチコイド反応性に変化が起こることが明らかとなった。
上記結果はイヌにおいて新規グルココルチコイド受容体スプライシングバリアントが存在し、細胞のグルココルチコイド反応性を変化させていることを示唆している。次年度はグルココルチコイド感受性の異なるイヌの細胞株について、各スプライシングバリアントの発現状況を確認し、グルココルチコイド感受性との関連性を検証する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の予定通りに実験が進んでおり、イヌの新規グルココルチコイド受容体スプライシングバリアントの存在と機能の一部が確認できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度は、発見した新規スプライシングバリアントについてグルココルチコイド感受性の異なるイヌの細胞株における発現状況を検証する。また、細胞株にトランスフェクションすることで、細胞のグルココルチコイド感受性に変化が現れるかどうかなどの機能解析を行う予定である。
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