2020 Fiscal Year Research-status Report
IG-DMR母方欠失マウスにおいて周産期致死を引き起こす責任配列の探索
| Project/Area Number |
19K06451
|
|---|
| Research Institution | Saga University |
|---|
Principal Investigator |
原 聡史 佐賀大学, 医学部, 助教 (80739582)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | ゲノムインプリンティング / Dlk1-Dio3ドメイン / IG-DMR / ゲノム編集 / 2細胞期インジェクション |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、これまでに報告されたIG-DMRの4.1 kb欠失マウスで認められた母方由来で周産期致死となる表現型の責任領域を探索することを目的としている。昨年度までに、IG-DMR内部のGtl2側2.7 kb領域が母方アレルにおいて重要であることを明らかにした。今年度は、IG-DMR内部の2.7 kb領域の内部をさらに3つの領域に分け、それぞれの領域を欠失させたマウスについて、欠失を父由来あるいは母由来で遺伝した場合の表現型を解析した。その結果、すべての欠失で父由来、母由来のいずれにおいても周産期致死は認められず、その他にも顕著な表現型は認められなかった。このことから、欠失アレルの母由来遺伝による周産期致死は、IG-DMRの2.7 kb領域すべてを欠失した場合に生じることが示唆された。それぞれの部分欠失マウス胚を用いてインプリント遺伝子の発現を解析したところ、このうちのひとつでGtl2の発現低下が認められた。
また、生後致死を示したIG-DMR内部のGtl2側3 kbを欠失したマウスを用いて、多型を利用したDNAメチル化解析および発現アレル解析を行った。その結果、これまでの報告と同様、Dlk1およびDio3の両アレル発現が認められ、IG-DMRおよびGtl2-DMRは母方アレルが高メチル化状態となっていることが明らかになった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初予定していた実験を概ね達成することができた。部分欠失マウスの表現型解析の結果、すべてで周産期致死が認められなかったのは意外な結果であった。しかしながら欠失の一つでGtl2の発現低下が認められたことから、複数の制御領域を同時に欠失した場合に周産期致死を引き起こす可能性が示唆された。また、DNAメチル化解析からも興味深い予備的結果が得られていることから、おおむね順調と判断された。
|
| Strategy for Future Research Activity |
次年度は、部分欠失マウスにおけるより詳細な分子生物学的解析を行う。また、IG-DMR内部の繰り返し配列の父方アレルにおける欠失をレスキューするような領域の探索も行う予定である。
|
| Causes of Carryover |
新型コロナウィルスに伴う移動制限および学会のオンライン開催化によって旅費が不要になったこと、マウスの作出および解析が当初想定していた予算より少ない費用で行うことができたために生じた。これらは次年度のマウス作出および維持費、発現解析およびメチル化解析のための消耗品費に充てる。
|
