2020 Fiscal Year Research-status Report
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19K06458
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
吉信 公美子 熊本大学, 生命資源研究・支援センター, 助教 (20274730)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
荒木 正健 熊本大学, 生命資源研究・支援センター, 准教授 (80271609)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | マウス / 染色体領域 / ゲノム編集 / 表現型解析 / 繰返し配列 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は、可変型遺伝遺伝子トラップ法でトラップされた配列がゲノム上のどこに位置するか同定する過程で、ある特定の範囲に配列が繰り返す領域を、異なる染色体で４箇所発見した（CSCT2, 4, 12, 13 と呼ぶ）。本研究では、CSCT2 およびCSCT4 の欠損マウスを作製し、マウス生体におけるCSCTの機能解析を行う。
本年度は特にCSCT4の解析を中心に進めた。CRISPR-Cas9システムにより4番染色体上のCSCT4（2.1Mbp）を欠損させたマウスを作製し、ヘテロ接合体を得た。ヘテロ接合体には顕著な表現型は見られなかった。ホモ接合体の表現型を解析するため、ヘテロ接合体同士を交配したところ、ホモ接合体はメンデルの法則に従って生まれた。さらに、ホモ接合体の生後10週齢までの成長は野生型と違いはなく、ホモ接合体同士の交配で得られた産仔数にも違いはなかった。RT-PCRにより、ホモ接合体においてCSCT4内の遺伝子は発現しておらず、CSCT4は欠損されていることを確認した。
これらの結果により、CSCT4を欠損させても生存や成長、形態、生殖能には大きく影響しないことが示唆された。表現型は見つかってはいないが、発現変動を調べ、それに基づく表現型解析を計画することを検討している。そこで、CSCT2欠損およびCSCT4欠損ES細胞を樹立し、ES細胞から抽出したRNAを用いて、RNA-seqによる網羅的発現解析を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
CSCT2に次いで、ゲノム編集によりCSCT4の欠損マウス作製に成功した。本マウスにおいて表現型解析を行い、発現解析も進めているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、RNA-seqデータ解析の環境を整える。現在、CSCT2についてRNA-seq解析を進めており、CSCT4についてもRNA-seq解析を行う。CSCT2欠損マウスおよびCSCT4欠損マウスの表現型解析において顕著な表現型が見られていないが、RNA-seq解析によりCSCT欠損の影響を探索し、それに基づく表現型解析を進めたいと考えている。
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| Causes of Carryover |
RNA-seq受託解析費を次年度に計上するため。
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Research Products
(5 results)
