2019 Fiscal Year Research-status Report
細胞質における機能性RNA生成機構の解明とRNAベクター技術への応用
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19K06501
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| Research Institution | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology |
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Principal Investigator |
佐野 将之 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 主任研究員 (80415687)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | microRNA / RNAi / 細胞質RNAベクター / 人工miRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
microRNA（miRNA）は約22塩基のノンコーディングRNAであり、配列依存的に標的遺伝子の発現を抑制することで、様々な生命現象を制御している。miRNAはゲノムから長鎖pri-miRNAとして転写され、核内において約70塩基の特徴的なヘアピン構造を持つpre-miRNAへとprocessingされる。その後、pre-miRNAは細胞質に輸送され、さらにprocessing を受けることで、成熟miRNAとなることが知られている。しかしながら、細胞質局在型ウイルスベクターから産生したpri-miRNAも成熟miRNAにprocessingされることが分かっており、このことから、細胞質における特有のmiRNA processing機構があることが示唆される。本年度は、マウスまたはヒトのゲノムにコードされる様々な種類のmiRNA前駆体を細胞質局在型RNAウイルスであるセンダイウイルスを骨格としたベクターにより培養細胞で発現させ、pri-miRNA前駆体のprocessing効果をmiRNA発現量またはRNAi活性を調べることで評価した。その結果、miRNA前駆体の種類により、processingの効果は大きく異なり、特にmmu-miR-367前駆体が効率よくprocessingされるという結果を得た。さらに、mmu-miR-367前駆体を利用することで、細胞質局在型RNAウイルスベクターから効率よくluciferaseなどを標的とした人工miRNAを発現し、RNAiを誘導できることが確かめられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
細胞質局在型RNAウイルスベクターを用いることで、細胞質でのmiRNA前駆体のprocessingを評価することができ、その中でも特にprocessing効果の高いmiRNA前駆体の情報を得ることができたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
細胞質局在型RNAウイルスベクターを用い、配列や構造をさらに変化させたmiRNA前駆体のprocessingを調べることで、細胞質でのmiRNA前駆体のprocessingに影響を与える要因の検証を行う。
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| Causes of Carryover |
今年度の研究の進捗状況に合わせ、一部を次年度に使用することとし、主に研究の遂行に必要な消耗品の購入のために使用する。
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