2019 Fiscal Year Research-status Report
Sortilinの新規リガンド分泌機構の分子基盤とその好酸球における役割
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19K06550
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
和田 俊樹 (矢部俊樹) 金沢医科大学, 医学部, 講師 (10451634)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
海野 昌喜 茨城大学, 理工学研究科(工学野), 教授 (10359549)
小内 伸幸 金沢医科大学, 医学部, 教授 (50323605)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | サイトカイン / 蛋白質輸送 / 好酸球 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
様々な免疫細胞から産生される炎症性サイトカインの分泌制御は，適切な炎症応答のバランスを保つうえで極めて重要である．これまで，マクロファージや樹状細胞，好酸球などに強く発現しているSortilinが様々なサイトカインと相互作用し，形質細胞様樹状細胞におけるIFN-αの細胞外への輸送に重要な役割を果たすことを明らかにしてきた．また，SortilinがTLRシグナル依存的にmRNAレベルで分解されること，定常状態でSortilin mRNAがRNA結合蛋白質のPCBP1と結合し安定化されていること，細胞内の亜鉛濃度に依存してSortilin mRNAがPCBP1と解離することで分解されることを見出した．ごく最近，Sortilinの新規リガンドを探索した結果，リガンドXと強く結合することを見出した．そこで本研究では，リガンドXを強く発現するとともに，Sortilinを強く発現するアレルギーエフェクター細胞である好酸球におけるSortilinの機能を，細胞レベル及びコンディショナルノックアウトマウスを用いた個体レベルにて明らかにする．更に，SortilinとリガンドXの複合体構造をX線結晶構造解析にて，Sortilinのリガンド認識機構を原子レベルでも明らかにすることで，Sortilinの好酸球における機能を，原子レベルから個体レベルで明らかにすることを目指す．
本年は，Sortilinの好酸球特異的Sortilin欠損マウスの作成とリガンドXの精製を行った．マウスに関しては，安定的な作出に至るまでに時間を要してしまった．リガンドXに関しては，発現系の構築まで完了したが，精製に関して，その物理的性状によって，精製系の確立に時間を要している．一方，Sortilin発現制御機構に関連して新たな知見を見いだした．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
リガンドXの精製条件確立に少し時間を要している．また，世界的に蔓延しているCOVID-19の影響により，海外から導入手続きを進めていた遺伝子改変マウスの輸入が，先方の施設閉鎖により搬出直前で中断している．一方，Sortilinの結晶構造解析については，結晶化条件の最適化がある程度終了した．
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| Strategy for Future Research Activity |
結晶構造解析についてはこのまま進める．機能解析については，コンディショナルノックアウトマウスを用いた解析を進める．また，COVID-19パンデミックによる影響で中断しているマウスの導入が完了次第，交配と動物の作出を進める．
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| Causes of Carryover |
COVID-19の世界的な蔓延によって，当該年度中に導入予定の遺伝子組み換えマウスの輸送が，送り主の施設閉鎖に伴い中断している．そのため，その輸送に必要な費用が未使用額として生じた．中断しているマウス導入プロセスの再開後，速やかにマウスの導入を行う費用として使用する．
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Research Products
(2 results)
