2020 Fiscal Year Research-status Report
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19K06749
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| Research Institution | Okinawa Institute of Science and Technology Graduate University |
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Principal Investigator |
中澤 友紀 沖縄科学技術大学院大学, サイエンステクノロジーグループ, サイエンス・アンド・テクノロジー・アソシエイト (50508851)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 中心子 / 中心小体 / 鞭毛 / 繊毛 / トリプレット微小管 / ダブレット微小管 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
中心子と、そこから伸長する繊毛軸糸を構成する「トリプレット・ダブレット微小管」は、その構造、結合タンパク質、安定性などが細胞質微小管とは異なっており、形成機構については大部分が未解明である。最近、我々は中心子トリプレット微小管形成に関与すると考えられる、複数のタンパク質の新規クラミドモナス突然変異株を単離した。本研究では、各変異株の変異遺伝子間の遺伝的相互作用を解析し、トリプレット微小管の形成機構を分子レベルで解明することを目指す。本年度は以下のように研究を進めた。
１）γ-tubulinについて
我々の以前の研究から、細胞質微小管の核形成に必須なタンパク質として知られるγ-tubulinが、トリプレット微小管形成にも寄与することが示唆されている。本年度はγ-tubulinの新規突然変異株であるbld13の中心子の異常を、電子顕微鏡により詳細に観察を行った。その結果、トリプレットの特定の部位が一部欠失する、というbld13の異常はproximal側でより頻繁に生じていることがわかった。このことから、γ-tubulinがトリプレット微小管形成初期に関与することが示唆された。また、観察数の増加により、トリプレット欠失部位がある程度特定できた。
２）トリプレット関連多重変異株の解析
これまで、bld13、およびトリプレット関連タンパク質Poc1、SAS-4のそれぞれの新規突然変異株、poc1, bld14を用い、掛け合わせによる多重変異株の作成と表現型解析を進めており、本年度はbld13bld14の作成、単離した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
2020年度から所属機関を変更し、研究環境のセットアップを０から行なった。
独立研究員という身分であるため、そのセットアップ作業をほぼ一人で行ったことと、コロナ禍ということもあり、実際に入校可能になったのは5月末、培養室の工事完了は10月であった、という理由から、実験系、培養系の立ち上げにもかなりの時間を要した。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、さらなる多重変異株を掛け合わせによって作製する。作製済みの多重変異株については、まずは一細胞あたりの鞭毛数や核数のカウントなどの基本的な表現型解析を行う。さらに中心子マーカータンパク質、およびそれぞれの変異株の変異遺伝子産物に対する抗体を用いた間接蛍光抗体法による観察を行い、中心子構造の異常の有無やそれぞれの変異遺伝子産物の局在への影響を検討する。また、順次電子顕微鏡によりその中心子構造の異常を観察する。
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