2021 Fiscal Year Annual Research Report
血清由来エクソソーム含有低～中分子の定性・定量と統合失調症リスク診断への展開
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19K07175
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| Research Institution | Toho University |
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Principal Investigator |
小野里 磨優 東邦大学, 薬学部, 講師 (50610094)
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2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | エクソソーム / 血清 / アミノ酸 / 誘導体化 / LC-MS/MS |
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| Outline of Annual Research Achievements |
当教室においてデザイン・開発されたLC/MS用誘導体化試薬 COXA-OSuは、COXA標識アミノ酸の安定性が乏しいという欠点があった。そこで、COXA標識体の不安定性の原因となっているオキサゾリジノン構造を、より安定なイミダゾリジノンに変換した新規化合物CIMa-OSuを合成したところ、安定性が改善された。加えて、CIMa-OSu標識アミノ酸の開裂パターンの検討より、1級アミン標識体でのみ [M-H] > [M-H-43] および [M-H-194] が生じ、既存のCOXA-OSuと同様のMS開裂の特徴が見られた。また、D-SerやD-Alaなどの微量D-アミノ酸も同時に定量が可能であった。さらに、CIMa-標識体を検出したクロマトグラムと、1級アミン特異的に検出（[M-H] > [M-H-194]）した両クロマトグラムを比較することでL-Pro等の2級アミン標識体のピークを容易に識別できた。本成果を論文投稿し、受理された（J Chromatogr A. 1652: 462341, 2021）。
続いて、ヒト血清より、市販キットを用いてエクソソーム顆粒画分を単離し、メタノール添加によりエクソソームの膜を破壊後、COXA-OSuと反応させ、LC-MS/MSにより分析した。D-およびL-アミノ酸組成を血清vs.エクソソームで比較解析し、エクソソーム特有の濃度の高い物質を見出した。アミノ酸以外のイオンピークについては、データベースを用いて化合物の構造推定や同定を試みた。既知物質として市販されていれば購入し、クロマトグラムの保持時間やMSスペクトルの開裂イオンパターンの一致を確認することにした。
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