The subunit composition of the AMPA-type glutamate receptor is analyzed by the highly sensitive detection method for membrane molecules that is combining SDS-FRL and genome editing techniques.

2021 Fiscal Year Final Research Report

• Project/Area Number: 19K07264
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 48010:Anatomy-related
• Research Institution: University of Fukui
• Principal Investigator: Kuroda Kazuki 福井大学, 学術研究院医学系部門, 准教授 (60557966)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 深澤 有吾 福井大学, 学術研究院医学系部門, 教授 (60343745)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: AMPA型グルタミン酸受容 / SDS処理凍結割断レプリカ標識 / 膜分子複合体 / サブユニット構成 / 局在解析 / 電子顕微鏡

Outline of Final Research Achievements

AMPA-type glutamate receptors (AMPARs) are membrane molecular complexes composed of four subunits. However, there has been no way to examine AMPARs with different subunit compositions at the single-molecule level in the brain. We generated mice with different epitope tags (E-tags) for each subunit of AMPARs and combined SDS-FRL and antigen retrieval to detect GluA2-containing AMPARs in the brain of 2xHA-GluA2 mice using anti-HA-tag antibody.

Free Research Field

神経科学

Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements

細胞の外と内の境に存在する細胞膜には、細胞の機能と深く関わる膜分子複合体が発現している。この膜分子は幾つかの部品から構成されていることが多く、同じ分子であっても構成する部品が異なると機能も変化する。しかし一つ一つの分子は小さく、1分子レベルで部品の構成を調べる方法が無かった。本研究では膜分子複合体であるAMPARを標的にして、部品構成が異なるAMPARを識別する方法論の確立を行った。本法の応用範囲は広く、多くの生命現象の素過程を支える分子メカニズムを膜分子複合体の多様性と特異性の観点から解明することに繋がる。