2019 Fiscal Year Research-status Report
The analysis of physiological functions of triacyl-type phospholipids
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19K07353
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| Research Institution | Kagawa University |
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Principal Investigator |
上田 夏生 香川大学, 医学部, 教授 (20193807)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宇山 徹 香川大学, 医学部, 助教 (30457337)
坪井 一人 川崎医科大学, 医学部, 講師 (80346642)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | N-アシルホスファチジルエタノールアミン / N-アシルエタノールアミン / ホスホリパーゼA2 / 酵素 / 脂質メディエーター / リン脂質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
「トリアシル型リン脂質」であるN-アシルホスファチジルエタノールアミン（N-アシル-PE）は、脂質メディエーターの一種である脂肪酸エタノールアミド（N-アシルエタノールアミン）の前駆体として知られるが、生理的意義については不明な点が多い。本研究では、PEのアミノ基に別のリン脂質分子から脂肪酸鎖を転移してN-アシル-PEを合成するN-アシルトランスフェラーゼ活性を有することが明らかになっているcPLA2εとPLAAT-1に焦点を絞り、N-アシル-PEの哺乳動物における存在意義とともに、両酵素の役割の違いを解明することを目的とする。
１年目の令和元年度は、以下の研究を実施した。
１）cPLA2εとPLAAT-1をそれぞれ安定的に発現する哺乳類細胞株を樹立した。これらの細胞の培地にカルシウム・イオノフォアを添加すると、前者ではN-アシル-PEの細胞内レベルが著増したのに対し、後者では変化が認められず、生細胞内でもCa2+依存性の有無が明確に示された。
２）脳のホモジネートのN-アシルトランスフェラーゼ活性は、幼少期に高く成長につれて低下する。野生型マウスを用いてcPLA2εとPLAAT-1の週齢ごとに脳のmRNAレベルをPCRで測定したところ、前者は出生直後が最も高く、成長とともに低下するのに対し、後者ではむしろ漸増した。幼少期に高い酵素活性はCa2+依存性を示すことからも、責任酵素はcPLA2εであると考えられた。
３）摘出後、暫く放置した脳は一種の脳虚血モデルであり、N-アシル-PEが蓄積する。このように処理した野生型マウスとcPLA2ε欠損マウスの脳を用いてLC-MS/MSで脳内のN-アシル-PE含量を測定したところ、野生型で観察されたN-アシル-PEの蓄積はcPLA2ε欠損マウスでは認められなかった。このことから本現象の責任酵素はcPLA2εであると考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究課題に沿った研究を実施した結果、マウス脳においてN-アシルトランスフェラーゼ活性を有することが明らかになっているcPLA2εとPLAAT-1の２つの酵素について、生理的役割の違いが明らかになりつつあることから、現在までの進捗状況はおおむね順調であると判断した。
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| Strategy for Future Research Activity |
遺伝子欠損マウスの飼育、繁殖は順調であり、初年度（令和元年度）の研究成果も期待通りであることから、当初の研究計画に従って、今後の研究を推進したい。
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| Causes of Carryover |
（理由）見積額より購入額が低かったため
（使用計画）次年度の薬品購入費用に充てる。
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[Presentation] 抗炎症・食欲抑制作用を有する脂質メディエーターであるN-アシルエタノールアミンの分解における酸性セラミダーゼの役割2020
Author(s)
坪井 一人, 田井 達也, 山下 量平, 宇山 徹, 岡本 蓉子, 郷 慎司, 渡邉 悦子, ラフマン イッファット アラ ソニア, 芳地 一, 田中 保, 岡本 安雄, 徳村 彰, 松田 純子, 上田 夏生
Organizer
第93回日本薬理学会年会
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[Presentation] Endogenous anionic phospholipid-assisted production of N-acyl-phosphatidylethanolamines by cytosolic phospholipase A2ε2019
Author(s)
Hussain, Z., Uyama, T., Mustafiz, S.S.B., Kawai, K., Tsuboi, K., Araki, N., Ueda, N.
Organizer
第60回日本生化学会中国・四国支部例会
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[Presentation] Anionic phospholipids facilitate the formation of N-acyl-phosphatidylethanolamines by cytosolic phospholipase A2ε2019
Author(s)
Uyama, T., Hussain, Z., Mustafiz, S.S.B., Kawai, K., Tsuboi, K., Araki, N., Ueda, N.
Organizer
60th International Conference on the Bioscience of Lipids
Int'l Joint Research
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[Presentation] Multiple pathways for N-acylethanolamine biosynthesis from N-acylphosphatidylethanolamine: tissue-dependent contribution of each pathway2019
Author(s)
Tsuboi, K., Inoue, M., Okamoto, Y., Hidaka, M., Uyama, T., Tsutsumi, T., Tanaka, T., Okamoto, Y., Ueda, N., Tokumura, A.
Organizer
60th International Conference on the Bioscience of Lipids
Int'l Joint Research
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[Presentation] Anionic phospholipids stimulate the Ca2+-dependent formation of N-acyl-phosphatidylethanolamines by cytosolic phospholipase A2ε2019
Author(s)
Hussain, Z., Uyama, T., Mustafiz, S.S.B., Kawai, K., Tsuboi, K., Araki, N., Ueda, N.
Organizer
第92回日本生化学会大会
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