2019 Fiscal Year Research-status Report
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19K07374
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| Research Institution | International University of Health and Welfare |
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Principal Investigator |
北川 元生 国際医療福祉大学, 医学部, 教授 (40262026)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
増田 渉 埼玉医科大学, 医学部, 助教 (00623464)
湯澤 聡 国際医療福祉大学, 医学部, 講師 (40515029)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | Notchシグナル / TM2D3 / ノックアウトマウス / アルツハイマー病 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
TM2D3タンパク質発現に関しては、現在ベクターを作製中である。
Tm2d3ノックアウトマウス胎生13.5-14.5日胎仔について、連続切片を作製し形態学的な表現型を検討している。その結果、ノックアウトマウスでは野生型に比較して大動脈の中膜が薄いことを見いだした。NotchリガンドであるJagged1等のいくつかのNotchシグナル系遺伝子のノックアウトマウスでは、血管平滑筋が低～無形成であることが報告されており、Tm2d3ノックアウトマウスも同様の表現型を持つ可能性が考えられる。またノックアウトマウスでは肝が低形成であり、胸腔が拡大していることを見いだした。胸腔の拡大は隣接する肝の低形成の二次的な変化であると考えられる。Notchシグナルはこの時期に肝で行われている二次造血の発生に重要であることが示されている。またNotchシグナルは肝内胆管の発生にも必要であることが示されているが、これが生じるのはこれよりやや遅い時期である。
そこで、Tm2d3ノックアウトマウス胎仔肝の造血幹細胞移植が重要であると考えられる。このためこのノックアウトマウス系統のC57BL/6系統への戻し交配を行っている。現在５回目の交配による仔が得られている段階である。
TM2D1とTM2D2の発現ベクターは作製した。
Tm2d1とTm2d2のノックアウトマウス系統は、米国の大学の共同研究者によって作製された。表現型の解析はわれわれが行うことになっている。
Amyloid precursor protein (APP) の発現ベクターを入手した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本研究に参画している大学院生が現在新型コロナウイルス感染症対策に参加しており、研究が滞っている。
Tm2d1とTm2d2のノックアウトマウス系統は、現在新型コロナウイルス感染症流行の影響で米国の共同研究者の大学がロックダウン中であり、飼育マウス数が削減され、さらに飼育担当者が現地でやはり新型コロナウイルス感染症対策に参加している。このため、マウス系統（凍結精子）の輸送が実現していない状況である。
アルツハイマー病モデルマウスは、提供元の理化学研究所バイオリソース研究センターが新型コロナウイルス感染症流行の影響で提供を中断中であるため、現在入手不可能である。
海外から抗APP抗体他の試料を入手するため、MTAを締結すべく当方の大学のサインをした書類を準備したが、現在新型コロナウイルス感染症流行の影響で郵便局が先方の国宛の郵便の取扱い停止中であり、この件も滞っている。
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| Strategy for Future Research Activity |
TM2D3タンパク質の発現に関しては、TM2D3の膜貫通ドメインをコードする領域を含んだcDNAを大腸菌の発現ベクターに組換えることを試みてきたが、現在まで成功していない。組換えの過程で、大腸菌に少量発現するタンパク質が膜貫通ドメインを有することが増殖に影響するなど可能性が考えられるので、今後この部分をコードする領域を除いたcDNA断片を組換えることを試みる。
Tm2d3ノックアウトマウスについては、血管平滑筋の発生に関して今後免疫染色法等を用いて検討する。
Tm2d3ノックアウトマウス胎仔肝の造血幹細胞移植に関しては、戻し交配の回数は十分であると考えられる。今後移植実験を行う。
Tm2d1とTm2d2のノックアウトマウス系統は共同研究者から、これら２系統については守りとおし、状況がよくなったら送付するという確約を得ている。凍結精子が入手できたら、マウス個体を復元して本学において飼育を開始しさらに表現型の解析に着手する。
APPの研究に関しても、状況が改善したら計画通り研究を推進する。
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| Causes of Carryover |
新型コロナウイルス感染症流行の影響で今年度実現できなかった、海外からのノックアウトマウス凍結精子の輸送、凍結精子からマウス個体の作製、同じく海外からの試料（抗体他）の輸送の費用にあてる計画である。
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[Journal Article] Maternal almondex, a neurogenic gene, is required for proper subcellular Notch distribution in early Drosophila embryogenesis.2020
Author(s)
Das P., Salazar J. L., Li-Kroeger D., Yamamoto S., Nakamura M., Sasamura T., Inaki M., Masuda W., Kitagawa M., Yamakawa T., Matsuno K.
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Journal Title
Development, Growth & Differentiation
Volume: 62
Pages: 80-93
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Presentation] TM2 domain containing 3, a mammalian homologue of Drosophila neurogenic gene product Almondex, regulates surface presentation of Notch receptors2019
Author(s)
Masuda W., Yamakawa T., Ajima R., Miyake K., Umemiya T., Azuma K., Tamaru J.-i., Kiso M., Saga Y., Matsuno K., Kitagawa M.
Organizer
The Notch Meeting XI
Int'l Joint Research
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