2022 Fiscal Year Annual Research Report
発がん感受性に寄与する表皮細胞とランゲルハンス細胞間の相互作用解析
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19K07494
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| Research Institution | Chiba Cancer Center (Research Institute) |
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Principal Investigator |
奥村 和弘 千葉県がんセンター(研究所), がんゲノムセンター 実験動物研究部, 研究員 (80584680)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
若林 雄一 千葉県がんセンター(研究所), がんゲノムセンター 実験動物研究部, 部長 (40303119)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | DMBA/TPA多段階皮膚発がん / 表皮細胞 / 樹状細胞 / コンディショナルKOマウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は発がんマウスモデルを用いた解析により、がん感受性に関与する原因遺伝子をSNPレベルで明らかにすること、また皮膚発がん感受性に寄与する表皮細胞（KC）とランゲルハンス細胞（LC）を含めた樹状細胞（DC）間の相互作用の遺伝学的解析をすることを目的としている。当該年度は、Pak1floxマウスの作製を実施した。Pak1の開始コドンを含むエクソン2を挟み込む形でloxp配列を挿入する2か所を設定した。FVBマウスの受精卵にエレクトロポレーション法により、Cas9タンパク質、合成CRISPR RNA、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド（ssODN）を導入し、PCRスクリーニングを行い、ファウンダーマウスを得た。FVBマウスとさらに交配し、Pak1-floxマウスを作製した。その後、FVB遺伝子背景のKC特異的K14CreERマウスとPak1-floxマウスを交配し、K14CreER-Pak1fl/flマウスを作製した。加えてB6遺伝子背景のDC特異的Cd11cCreマウスとPak1-floxマウスを交配し、F1-Cd11cCre-Pak1fl/+マウスを作製した。同様にB6遺伝子背景のLC特異的Cd207CreERマウスとPak1-floxマウスを交配し、F1-Cd207CreER-Pak1fl/+マウスを作製した。これらのマウスのPak1欠損をゲノム、RNAおよびタンパクレベルで確認することができた。したがって、3種類の細胞特異的Pak1コンディショナルKOマウスを作製することに成功した。
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