2020 Fiscal Year Research-status Report
コレラ菌における染色体数のバリエーションに関する研究
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19K07551
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
山本 章治 国立感染症研究所, 細菌第一部, 主任研究官 (80469957)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 単一染色体 / コレラ菌 / 組換え / 複製 / 合成致死 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は染色体数のバリエーションがコレラ菌の生存戦略に果たす役割について明らかにすることを目的とする。本年度は染色体2複製開始因子RctBの必須性・非必須性の表現型を指標として、コレラ菌の染色体数の変動をモニターするための系を確立した。まず、bla遺伝子、rctB遺伝子、lacZ遺伝子およびコレラ菌染色体2の複製起点（ori2）を運ぶレポータープラスミドを構築し、rctB遺伝子およびlacZ遺伝子を欠失させた単一染色体株に導入した。この形質転換体をアンピシリン非存在下で培養した場合、単一染色体株が増殖にRctBを必要としないことに加え、プラスミド上のori2の活性が著しく不安定なために、レポータープラスミドは容易に欠落し、ほぼ100%がLac-の表現型を示した。これに対して、増殖にRctBを必須とする通常の二染色体株（同様にrctB遺伝子とlacZ遺伝子の二重欠失体）では、アンピシリン非存在下でもレポータープラスミドは非常に安定に保持されており、ほぼ100%がLac+であった。以上のことから、RctBの必須性はコレラ菌の染色体数の変動をモニターする上で非常に有用であることがわかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
染色体数の変動をモニターするための系を確立したものの、それを利用して染色体数が変動した株をスクリーニングするまでには至らなかったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
１）染色体数の変動をモニターするための系を用いて、染色体数が一本から二本、もしくは二本から一本に変化した株をスクリーニングする。
２）RNA-seqを用いて、単一染色体株と二染色体株の遺伝子発現プロファイルを比較する。
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| Causes of Carryover |
年度末納品等にかかる支払いが、令和３年４月１日以降となったため。当該支出分については次年度の実支出額に計上予定であるが、令和２年度分についてはほぼ使用済みである。
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