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2020 Fiscal Year Research-status Report

Molecular mechanism of hepatitis B virus DNA integration

Research Project

Project/Area Number 19K07583
Research InstitutionNational Institute of Infectious Diseases

Principal Investigator

村松 正道  国立感染症研究所, ウイルス第二部, 部長 (20359813)

Project Period (FY) 2019-04-01 – 2022-03-31
Keywordshepatitis B virus / integration / chronic hepatitis / cccDNA / tumorigenesis
Outline of Annual Research Achievements

B型肝炎ウイルスやパピローマウイルスなどの小型DNA型腫瘍ウイルスは、それぞれ肝細胞癌や子宮頸がんを起こすが、その発癌の過程でウイルスゲノムDNAが宿主細胞のゲノムに挿入される。挿入されたウイルスゲノム上にはウイルス由来がん遺伝子があることから、挿入の結果、がん遺伝子産物が恒久的に発現することとなる。恒久的がん遺伝子発現と挿入部位の遺伝子発現が乱れることと相まって、癌ゲノム進化が大きく進むとされており、この分子機構の解明が重要となってくる。
本研究では、主に培養細胞系を中心として臨床検体やマウス検体を用いつつ、この分子機序の解明に取り組む。この分子機序解明の1つの律速段階が、ウイルスゲノム挿入の検出方法であり、これまでの方法は、感度や定量性、煩雑さなど様々な問題があることが知られている。今年度は、昨年度新たに開発した新規ゲノム挿入検出方法を用いて、以下の実験を行った。1、HBVのゲノム挿入がある培養細胞を用いて実際にゲノム挿入が検出できるか検討、2、HBV感染受容体発現肝細胞株や初代肝細胞を用いた感染実験でのウイルスゲノム挿入の検討、3、ヒト肝キメラマウスの動物HBV感染モデルでの検証。 これら3系統の実験において新規ゲノム挿入検出方法でウイルスゲノム挿入を捉えることができた。ゲノム挿入機序の分子メカニズムに近づくには、方法論の効率化や、定量性の向上、既存の方法との比較などが必要で、その点は現在進行中である。一方、臨床検体で検出できるかも病体解析に応用する上で重要な点であるので、今後、プロトコールの改良に取り組む。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

分子機序解明をめざしており、ウイルスゲノム挿入を決める因子の同定を1つの目標にしている。現時点でその因子の同定に至っていないので、そこに至っていないという意味でやや遅れているとした。感染実験系にて観察されるゲノム挿入現象の頻度が候補因子の発現の有無で変化するかで因子の同定をめざしたい。そのためにはゲノム挿入頻度を適切に評価できるよう検出系をさらに改良する必要がある。

Strategy for Future Research Activity

ゲノム挿入頻度を簡便に定量的に測定できる方法論があると本研究は大きく進むと考えられる。本研究で開発した方法論以外に、新規方法論としてウイルス側にマーカー遺伝子を挿入し、そのマーカー遺伝子を利用して定量的にウイルスゲノム挿入を測定する方法論の開発を着手した。

Causes of Carryover

次世代シークエンス外注の支払いに関連して、2020年度から2021年度へ持ち越しが派生した。

  • Research Products

    (6 results)

All 2021 2020

All Journal Article (6 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 6 results,  Open Access: 2 results)

  • [Journal Article] Identification of novel avian and mammalian deltaviruses provides new insights into deltavirus evolution2021

    • Author(s)
      Iwamoto Masashi、Shibata Yukino、Kawasaki Junna、Kojima Shohei、Li Yung-Tsung、Iwami Shingo、Muramatsu Masamichi、Wu Hui-Lin、Wada Kazuhiro、Tomonaga Keizo、Watashi Koichi、Horie Masayuki
    • Journal Title

      Virus Evolution

      Volume: 7 Pages: in press

    • DOI

      10.1093/ve/veab003

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Extracellular vesicles secreted by HBV-infected cells modulate HBV persistence in hydrodynamic HBV transfection mouse model2020

    • Author(s)
      Kakizaki Masatoshi、Yamamoto Yuichiro、Otsuka Motoyuki、Kitamura Kouichi、Ito Masatoshi、Kawai Hideki Derek、Muramatsu Masamichi、Kagawa Tatehiro、Kotani Ai
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry

      Volume: 295 Pages: 12449~12460

    • DOI

      10.1074/jbc.RA120.014317

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Non-nucleoside hepatitis B virus polymerase inhibitors identified by an in vitro polymerase elongation assay2020

    • Author(s)
      Nakajima Shogo、Watashi Koichi、Fukano Kento、Tsukuda Senko、Wakae Kousho、Aizaki Hideki、Muramatsu Masamichi、Wakita Takaji、Toyoda Tetsuya
    • Journal Title

      Journal of Gastroenterology

      Volume: 55 Pages: 441~452

    • DOI

      10.1007/s00535-019-01643-0

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] MCPIP1 reduces HBV-RNA by targeting its epsilon structure2020

    • Author(s)
      Li Yingfang、Que Lusheng、Fukano Kento、Koura Miki、Kitamura Kouichi、Zheng Xin、Kato Takanobu、Aly Hussein Hassan、Watashi Koichi、Tsukuda Senko、Aizaki Hideki、Watanabe Noriyuki、Sato Yuko、Suzuki Tadaki、Suzuki Hiroshi I.、Hosomichi Kazuyoshi、Kurachi Makoto、Wakae Kousho、Muramatsu Masamichi
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 10 Pages: 20763

    • DOI

      10.1038/s41598-020-77166-z

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Identification of Two Critical Neutralizing Epitopes in the Receptor Binding Domain of Hepatitis B Virus preS12020

    • Author(s)
      Yato Keigo、Onodera Taishi、Matsuda Mami、Moriyama Saya、Fujimoto Akira、Watashi Koichi、Aizaki Hideki、Tanaka Tomohisa、Moriishi Kohji、Nishitsuji Hironori、Shimotohno Kunitada、Tamura Koji、Takahashi Yoshimasa、Wakita Takaji、Muramatsu Masamichi、Kato Takanobu、Suzuki Ryosuke
    • Journal Title

      Journal of Virology

      Volume: 95 Pages: im press

    • DOI

      10.1128/JVI.01680-20

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] N‐Terminal PreS1 Sequence Regulates Efficient Infection of Cell‐Culture?Generated Hepatitis B Virus2020

    • Author(s)
      Murayama Asako、Yamada Norie、Osaki Yoshiki、Aly H Hassan、Watashi Koichi、Matsuda Mami、Suzuki Ryosuke、Tanaka Tomohisa、Moriishi Kohji、Suzuki Tetsuro、Nishitsuji Hironori、Sugiyama Masaya、Mizokami Masashi、Shimotohno Kunitada、Wakita Takaji、Muramatsu Masamichi、Liang. Jake、Kato Takanobu
    • Journal Title

      Hepatology

      Volume: 73 Pages: 520~532

    • DOI

      10.1002/hep.31308

    • Peer Reviewed

URL: 

Published: 2021-12-27  

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