2019 Fiscal Year Research-status Report
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19K07587
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
津田 祥美 北海道大学, 医学研究院, 講師 (70447051)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森松 組子 (吉松組子) 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 准教授 (90220722)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | ウイルス / 病原性 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本課題ではエボラウイルスの主要標的細胞とされているマクロファージや肝細胞でのウイルス増殖がエボラウイルス感染症で観察される病態にどのように関与しているのか、ウイルスの組織指向性や主要標的細胞での増殖能力と致死的病態の関連性を明らかにすることを目的とする。これまでの解析によりマクロファージや樹状細胞で主に発現しているmicroRNAのターゲット配列をウイルス遺伝子に組込むことでマクロファージや樹状細胞でのウイルス増殖を抑制した組換えエボラウイルス作出可能であることを示した。また作出したウイルスは著しく病原性が減弱したことから、感染初期におけるマクロファージや樹状細胞でのウイルス増殖の重要性を示した。本研究ではクロファージや樹状細胞で増殖したウイルスが次にターゲットとし、重要な宿主応答に関与していると考えられる肝細胞でのウイルス増殖を抑制したウイルスの作成を試みた。これまでのC型肝炎ウイルスなどの研究により、肝臓で発現するいくつかのmicroRNAの重要性が報告されている。そこで本研究ではmicroRNA122をまずターゲットとして選び、microRNA122に対応する遺伝子配列を組み込んだ組換えウイルスの作出を試みた。これまでの研究と同様にマウスを用いた病原性解析を目的として、親株であるエボラウイルスとマウス馴化株に遺伝子組換えを行ったところ、ともにウイルスの作出を確認した。今後は作出したウイルスの細胞での増殖、マウスモデルを用いた病原性の解析を行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度までに解析に用いる組換えエボラウイルスの設計と作出を試みた。その結果目的の配列を組み込んだウイルスが作出され概ね順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
作出したウイルスのin vitroでの増殖を確認するなど性状解析を行う。microRNA-mimicを培養細胞に導入することでターゲットとするmicroRNA発現細胞を作出し、これまでに作出した組換えウイルスの増殖能力を比較検討する。また、マウス体内におけるmicroRNAの発現分布をqRT-PCR法により確認する。
in vitro解析の結果をもとに、マウスモデルに感染実験する。比較対象であるマウス馴化株、樹状細胞でのウイルス増殖を抑制した組換えエボラウイルスおよび肝細胞でのウイルス増殖を抑制したウイルスの病原性を観察する。さらに感染マウスを詳細に経過観察するとともに、標的臓器におけるウイルス増殖、免疫応答を比較解析することで、致死的病態に誘導する因子とこれらの因子が誘導されるタイミングの同定を試みる予定である。また、米国のBSL4での実験をする機会が減少する可能性があることから、実際のウイルスを用いないウイルスタンパク質による解析を行う。
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| Causes of Carryover |
本年度は、米国出張における実験計画を別の予算での出張の合間に行うことが可能であったため出張旅費として計画していた予算を節約することが可能であっった。本経費は次年度以降の物品費および出張旅費の補助費として使用する予定である。
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