2019 Fiscal Year Research-status Report
RNAのメチル化修飾がスキルス胃がんの転移で果たす機能の解明
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19K07698
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| Research Institution | Aichi Gakuin University |
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Principal Investigator |
原 敏文 愛知学院大学, 薬学部, 助教 (80456219)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
武井 佳史 愛知学院大学, 薬学部, 教授 (70362233)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | RNA修飾 / 癌転移 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
癌転移は、癌患者の死の主要な原因である。癌の発生原因を標的とした治療薬は開発されている一方で、これまで転移を標的とした癌の治療法は開発されていない。その原因の一つは、癌転移の分子機構が解明されていない点にある。そこで、申請者らは、これまでにスキルス胃がんの細胞モデルを用いて、癌転移の分子機構の解析を進めてきた。その研究の中で、新たにRNAのメチル化酵素METTL3の発現が転移能獲得に伴って上昇することを見出した。METTL3は、細胞内で最も豊富に存在するRNA修飾であるm6Aの生成に関わることが知られる。そこで、高転移能を有するスキルス胃がんの細胞モデルで、METTL3の発現を低下させたところ、細胞内のm6Aレベルが低下すると共に、細胞の遊走能が大きく低下することを見出した。これら結果は、m6Aが癌転移において重要な役割を果たしていることを示唆している。そこで、癌転移におけるm6Aの役割を明らかにするため、まず高転移能を有するスキルス胃がんの細胞モデルにおけるm6Aの存在箇所についてゲノムワイドな探索を試みた。具体的には、断片化したmRNAに対して、抗m6A抗体を用いた免疫沈降を行い、そのサンプルを次世代シークエンサーで解析を計画した。この過程において、mRNAの断片化や次世代シークエンサー解析のためのアダプター付加について、条件検討を行った。その後、次世代シークエンサーにより抗m6A抗体を用いた免疫沈降サンプルの解析まで行った。研究実施計画通りに、初年度は次世代シークエンサーによるデータ取得まで終了した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画通り、スキルス胃がんの転移細胞モデルからMETTL3ノックダウン細胞株の樹立とその機能解析を行った。また、これら細胞株を用いて、RNA免疫沈降サンプルからシークエンサーによる解析までを終了した。初年度の研究計画全てを順調に達成した。
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| Strategy for Future Research Activity |
初年度の研究実施計画で取得した次世代シークエンサーの結果について、情報解析から2年目の研究を開始する。情報解析の手法は、日々更新されているので、複数の方法による解析を試みて、その結果について個別に検証を進めていく予定である。
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| Causes of Carryover |
次世代シークエンサーによる解析が、受託解析となった一方で、コロナウイルス 蔓延の影響で解析の迅速化オプションが無効となり、解析費用に差額が生じた。しかし、この費用を、次年度の初年度に得られた結果の検証に回し、検証サンプルを増やすことで、研究結果をより高い精度で検証することを計画している。
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[Journal Article] USP10 is a critical factor for Tau-positive stress granule formation in neuronal cells2019
Author(s)
Piatnitskaia S, Takahashi M, Kitaura H, Katsuragi Y, Kakihana T, Zhang L, Kakita A, Iwakura Y, Nawa H, Miura T, Ikeuchi T, Hara T, Fujii M
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 9
Pages: 10591
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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