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2019 Fiscal Year Research-status Report

新規癌抑制型miRNAによるMYC標的核酸抗癌薬の開発

Research Project

Project/Area Number 19K07709
Research InstitutionTokyo Medical and Dental University

Principal Investigator

玄 泰行  東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教 (80596156)

Project Period (FY) 2019-04-01 – 2022-03-31
KeywordsMYC / WNT/β-catenin
Outline of Annual Research Achievements

MYC経路を抑制するmiRNAのスクリーニングとして、まず2565種類のmiRNAを用いて2つの細胞株で共通して増殖抑制効果の高いmiRNAを138種類抽出した。次に、これらのmiRNAのうち、MYC経路を抑制するmiRNAをMYC レポーターアッセイを用いてスクリーニングを行い、これまでMYCを抑制することが報告されていない新規のmiRNA(labo name: miR-X)を抽出した。スクリーニングの結果を検証するため、miR-Xを複数の癌細胞に導入したところ、ウエスタンブロッティング法でMYCの発現が抑制されること、in vitroにおいて強い増殖抑制効果を発揮することが確認できた。
次に、miR-Xの標的遺伝子(miR-Xが直接結合してその発現を抑制する遺伝子)の探索、ならびに、miR-X導入によるグローバルな遺伝子発現変化を調べるため、2つの細胞株を用いて、miR-XあるいはmiR-NC(コントロール)を導入して、遺伝子発現アレイを行った。GSEA解析の結果、miR-X導入後、2つの細胞株において共通して、MYC targets、Glycolysis、WNT/β-catenin経路が抑制されることが明らかとなった。また、TCF/LEFレポーターアッセイを用いてWNT/β-catenin経路に対するmiR-Xの導入効果を検証することができた。これらの結果から、miR-XはMYC経路、WNT/β-catenin経路を抑制し、癌細胞の増殖を強く抑制することが明らかとなった。
現在、これらの発現アレイの結果及び、Targetscan等のmiRNA標的遺伝子予測データベースをもとに、miR-Xの直接の標的遺伝子の探索を行い、ルシフェラーゼレポーターアッセイを用いて検証を行う準備を進めている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

これまでに当研究室で積み上げてきた解析手法、ライブラリースクリーニングの手技などが確立されており、計画的に研究を進めることができた。

Strategy for Future Research Activity

MYC経路を抑制する、新規のmiR-Xの標的遺伝子の探索をまず行う。発現アレイの結果、及び、miRNA標的遺伝子予測データベースの情報からすでに、複数の標的遺伝子候補を選び、ルシフェラーゼレポーターアッセイを用いて検証しつつある。
次に、miR-Xにより直接抑制される標的遺伝子が決まれば、当該遺伝子をノックダウンした際にMYCあるいは、WNT/β-catenin経路に対する評価を行う。用いる方法としてはウエスタンブロッティングによるMYC発現変化、TCF/LEF reporter assayによるWNT/β-catenin経路の評価を予定している。
また、並行してマウス皮下移植モデルを用いて、miR-Xの核酸抗癌薬としての可能性を評価する。用いる癌細胞はMYC経路に依存している細胞を予定している。

  • Research Products

    (5 results)

All 2019

All Presentation (4 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Presentation] 核酸抗癌薬を目指した新規腫瘍抑制型miRNAの探索2019

    • Author(s)
      玄 泰行、村松 智輝、井上 純、稲澤 譲治
    • Organizer
      第23回日本がん分子標的治療学会学術集会
  • [Presentation] Oligonucleotide therapeutics using a novel tumor-suppressive microRNA targeting MYC pathway2019

    • Author(s)
      Yasuyuki Gen, Tomoki Muramatsu, Jun Inoue, Johji Inazawa
    • Organizer
      第78回日本癌学会学術集会
  • [Presentation] Function-based microRNA library screening identified novel tumor suppressive microRNAs targeting BRD42019

    • Author(s)
      Yuki Takagawa, Yasuyuki Gen, Tomoki Muramatsu, Hiroyuki Harada, Johji Inazawa
    • Organizer
      第78回日本癌学会学術集会
  • [Presentation] Chang Liu, Yasuyuki Gen, Johji Inazawa2019

    • Author(s)
      miR-3140 suppressed tumor cell growth in neuroblastoma by targeting BRD4-MYCN pathway
    • Organizer
      第78回日本癌学会学術集会
  • [Patent(Industrial Property Rights)] マイクロRNA及びその誘導体を有効成分とする医薬組成物2019

    • Inventor(s)
      稲澤 譲治、玄 泰行、井上 純、村松 智輝、高川 祐希
    • Industrial Property Rights Holder
      国立大学法人 東京医科歯科大学
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      特願2019-233250

URL: 

Published: 2021-01-27  

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