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2019 Fiscal Year Research-status Report

腫瘍血管の分子標的・シアル化HEG1の分子性状解析

Research Project

Project/Area Number 19K07770
Research InstitutionKanagawa Cancer Center Research Institute

Principal Investigator

辻 祥太郎  地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), その他部局等, 主任研究員 (30285192)

Project Period (FY) 2019-04-01 – 2022-03-31
KeywordsHEG1 / 血管内皮細胞 / 中皮腫
Outline of Annual Research Achievements

SKM9-2抗体が認識するHEG1上の糖鎖修飾について、合成糖ペプチドを用いてビアコアにより解析を行った。SKM9-2抗体の安定した結合にはエピトープ上の二カ所のシアル化O型糖鎖が必須で、一カ所のみ、あるいはシアル化されていない糖鎖付加では解離の遅い安定した結合ができなかった。また、修飾されているシアル化糖鎖はモノシアリルTまたはジシアリルTで差はなく、さらにエピトープペプチドとSKM9-2抗体のFabの結晶構造解析から900番目のSerのα2-3結合シアル酸が結合の安定に重要であることが明らかとなった。
次に、血管内皮細胞におけるHEG1の基本的な動態を明らかにするために、SKM9-2と糖鎖非依存的な抗HEG1抗体(V8F11)を用いてHEG1の発現動態の解析を行った。ヒトテロメア逆転写酵素不死化血管内皮細胞を用いたフローサイトメーター解析では、細胞の増殖時期や成長因子/サイトカイン(VEGF、EGF、PDGF、TNF-α)刺激によって、二つの抗体の反応性に違いは生じなかった。また、培養シャーレの持続的振盪による機械的ストレスを与えた場合でも大きな影響は生じなかった。上記の刺激条件下において、SKM9-2と8F11の結合量比について解析を行ったが顕著な変化は認められなかった。ウエスタンブロッティング解析でもHEG1の分子量に大きな変化は認められなかった。
従って、血管内皮細胞におけるSKM9-2エピトープ内の糖鎖はモノシアリルTまたはジシアリルTで、増殖ステージや生化学的、または物理学的刺激によって明らかな変化は起こっていないと考えられた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

SKM9-2が認識(許容)する糖鎖構造を明らかにし、2019年度に予定していた、血管内皮細胞のHEG1の発現動態とSKM9-2エピトープ内の糖鎖構造を明らかにした。そのため、おおむね順調に進展していると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

明らかにした糖鎖構造(monosialyl Tまたはdisialyl T)は必ずしも腫瘍血管に特異的なものではなく、血管内皮細胞上のHEG1の糖鎖構成も刺激等により大きな変化をうけないと考えられる。そのため、腫瘍血管で特異的に起こるHEG1の糖鎖修飾の特異性は、糖鎖の構造そのものよりもエピトープ内のどのSer残基に糖鎖修飾がおこるのかが重要と考えられた。そこで、HEG1全体の糖鎖構成の解析と平行して、エピトープ内の糖鎖修飾に重要なO型糖鎖転移酵素(GALNT)の解析を加える。本解析を追加することにより、腫瘍血管に特異的な分子標的(SKM9-2エピトープ)の生成について、より詳しい知見が得られると期待できる。

Causes of Carryover

物品の使用量が予想よりもやや少なくてすみ、また、予定していた学会参加を中止した為。主に次年度の物品購入費として使用を予定している。

Remarks

辻 祥太郎. 創薬ターゲットとしての中皮腫特異的HEG1糖蛋白質. 第7回 AMED糖鎖創薬プロジェクトユーザーフォーラム講演

  • Research Products

    (14 results)

All 2020 2019

All Journal Article (4 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 2 results) Presentation (10 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 3 results)

  • [Journal Article] HEG1 is a Highly Specific and Sensitive Marker of Epithelioid Malignant Mesothelioma2020

    • Author(s)
      Naso Julia R.、Tsuji Shoutaro、Churg Andrew
    • Journal Title

      The American Journal of Surgical Pathology

      Volume: - Pages: -

    • DOI

      10.1097/PAS.0000000000001469

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] HEG1-responsive microRNA-23b regulates cell proliferation in malignant mesothelioma cells2020

    • Author(s)
      Fujii Tomomi、Itami Hiroe、Uchiyama Tomoko、Morita Kohei、Nakai Tokiko、Hatakeyama Kinta、Sugimoto Aya、Shimada Keiji、Tsuji Shoutaro、Ohbayashi Chiho
    • Journal Title

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      Volume: - Pages: -

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2020.03.172

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 中皮腫の糖鎖修飾がん抗原を標的とする抗体医薬の開発2019

    • Author(s)
      辻 祥太郎
    • Journal Title

      Drug Delivery System

      Volume: 34 Pages: 284-290

  • [Journal Article] 新しい悪性中皮腫マーカー・シアル化HEG1による精密・早期診断の開発と臨床への展開2019

    • Author(s)
      辻 祥太郎、今井 浩三
    • Journal Title

      医学のあゆみ

      Volume: 271 Pages: 810-816

  • [Presentation] HEG1 is useful for cytologic diagnosis of malignant mesothelioma with serosal effusions.2019

    • Author(s)
      Hiroshima K, Wu D, Ozaki D, Hasegawa M, Koh E, Sekine Y, Tsuruoka S, Hamakawa S, Nabeshima K, Tsuji S, Miyagi Y, Imai K.
    • Organizer
      The Pulmonary Pathology Society Biennial Meeting in Dubrovnik
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] ジオール結合タグを用いた回収型分子標的薬の開発.2019

    • Author(s)
      辻 祥太郎、今井 浩三
    • Organizer
      第70回日本電気泳動学会総会
  • [Presentation] 血液中の中皮腫マーカー・HEG1を測定可能なsandwich ELISA系の構築2019

    • Author(s)
      加藤 嵩大、森脇 康博、三澤 日出巳、今井 浩三、辻 祥太郎
    • Organizer
      第39回日本分子腫瘍マーカー研究会
  • [Presentation] 悪性中皮腫抗原を標的としたキメラ抗原受容体の最適化2019

    • Author(s)
      紅露 拓、辻 祥太郎、今井 浩三、笹田 哲朗
    • Organizer
      第78回日本癌学会学術総会
  • [Presentation] 抗中皮腫効果を有する二重特異性抗体2019

    • Author(s)
      金守 悠希、森脇 康博、三澤 日出巳、今井 浩三、辻 祥太郎
    • Organizer
      第10回グライコバイオロジクス研究会
  • [Presentation] 抗中皮腫効果を有する二重特異性抗体薬の開発2019

    • Author(s)
      金守 悠希、森脇 康博、 三澤日出巳、今井 浩三、辻 祥太郎
    • Organizer
      第42回日本分子生物学会年会
  • [Presentation] 回収型分子標的薬・インテレクチン融合TNF受容体を用いた血中TNFの選択的除去2019

    • Author(s)
      小畑 翔太郎、森脇 康博、三澤 日出巳、辻 祥太郎
    • Organizer
      第42回日本分子生物学会年会
  • [Presentation] 中皮腫の糖鎖修飾がん抗原を標的とする抗体医薬の開発2019

    • Author(s)
      辻 祥太郎
    • Organizer
      第35回日本DDS学会学術集会
    • Invited
  • [Presentation] 中皮腫がん抗原の探索と臨床への応用2019

    • Author(s)
      辻 祥太郎、今井 浩三
    • Organizer
      第1回日本石綿・中皮腫学会学術集会
    • Invited
  • [Presentation] 新しい中皮腫マーカー抗体 SKM9-2 とその抗原・シアル化 HEG12019

    • Author(s)
      辻 祥太郎
    • Organizer
      第14回中皮腫細胞診セミナー
    • Invited

URL: 

Published: 2021-01-27  

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