2019 Fiscal Year Research-status Report
プリオン様伝播モデルによるレビー小体型認知症病原蛋白質の本体解明と創薬基盤の構築
| Project/Area Number |
19K07858
|
|---|
| Research Institution | Fukuoka University |
|---|
Principal Investigator |
佐野 和憲 福岡大学, 薬学部, 准教授 (50534343)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | レビー小体型認知症 / α-シヌクレイン / プリオン様伝播 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、レビー小体型認知症（DLB）における、①内在性の正常なα-シヌクレイン（αSyn）からプリオン様伝播性を有する異常型αSynへの構造変換に関与する因子、②異常型αSynの正体の2つのいまだ明確になっていない基礎的問題の解決に迫り、DLBの病態解明・治療へと研究を展開するための研究基盤を構築することが目的である。
DLB脳で観察されるレビー小体の主要構成成分は、129番セリン（Ser129）-リン酸化を受けた凝集性を有するαSynであるため、上記①の異常型αSynへの構造変換に関与する因子として、αSynのリン酸化に着目した。
精製したリコンビナントαSyn（r-αSyn）に、Ser129を特異的にリン酸化する酵素およびATPを混和しインキュベートすることでr-αSynリン酸化反応を行った。反応後のサンプルをSDS-PAGEにより分離し、CBB染色後、16kDa付近の単一バンドを含むゲル片を切り出し、LC-MS/MSを用いてリン酸化部位を解析した。LC-MS/MS解析により、r-αSynはSer129以外のアミノ酸もまた顕著にリン酸化を受けることが明らかとなり、さらにその抗リン酸化抗体を用いたウェスタンブロット法（WB）によってもそのリン酸化を示すバンドが検出された。またWB解析により、DLB脳ではそのアミノ酸のリン酸化が凝集したαSynにおいて認められ、一方、他の疾患由来脳ではそのリン酸化は観察されなかった。
本研究により、上記①の異常型αSynへの構造変換に関与する候補因子として、αSynにおける新たなリン酸化を見出した。また、このリン酸化を示す異常型r-αSynの作製も完了した。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
異常型αSynへの構造変換に関与する候補因子の1つとして新たなリン酸化を同定することができ、またこのリン酸化を有する異常型r-αSynの作製も完了しているから。
また、作製した異常型r-αSynのプリオン様伝播性を解析する方法についても準備が完了している。
|
| Strategy for Future Research Activity |
作製した異常型r-αSynの伝播性を、RT-QuICによるハイスループット解析で評価する。また、異常型r-αSynを培養細胞あるいはマウス脳内へ暴露し、異常型αSynの広がり・蓄積をWestern blot、免疫組織化学染色法により解析することで細胞間における伝播性を評価する。さらに、異常型r-αSynについて、分子サイズ、形態、二次構造などの構造学的解析を行い、伝播性を有する異常型r-αSynの本体の解明に取り組む。
|
