2021 Fiscal Year Annual Research Report
microRNA-6126によるHBV増殖抑制機構の解明
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19K07941
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| Research Institution | Kagawa University |
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Principal Investigator |
藤田 浩二 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (50749421)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | B型肝炎 / 感染症 / microRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
HBVが肝細胞に侵入する時，HBVがPreS1抗原と肝細胞表面に発現するNTCPとの結合を介して肝細胞に吸着し，肝細胞の中に取り込まれる．NTCPを遺伝子導入した肝細胞であるHepG2-NTCPにmiR-6126をトランスフェクションすると，NTCPの発現が抑制されることをWestern Blotと免疫染色で明らかにすることが出来た．さらに，蛍光色素で標識したPreS1抗原を用いて，PreS1抗原の肝細胞表面への吸着を評価すると，miR-6126トランスフェクション群では対照群に比べて，PreS1抗原の吸着が減弱していた．ヒト初代継代肝細胞を用いた評価でも，miR-6126はPreS1抗原の肝細胞表面への吸着を減少させていた．以上の結果から，miR-6126はHBVの肝細胞表面への吸着を抑制することが明らかとなった．これにより，miR-6126がHBVの肝細胞への感染を抑制する可能性が示唆された．
次に，miR-6126の標的遺伝子を探索した．HepG2-NTCP細胞をmiR-6126群と対照群に分けて，トランスクリプトーム解析を行い，1万種類以上の遺伝子のmRNAの発現の増減を評価した．その結果，miR-6126トランスフェクション群において対称群に比べて，25遺伝子の発現が有意に抑制されていた．しかし．この25遺伝子うちに，miR-6126の標的遺伝子は存在しなかった．NTCPそのものも，そのmRNAの3'末にmiR-6126との相補的な配列はなく，miR-6126がNTCPのmRNAに直接結合してその翻訳を抑える，とは考えにくかった．しかし，miR-6126の転写産物のintron領域に，miR-6126が結合し得る配列が22か所存在した．この配列の存在意義を明らかにすることは，時間的かつ予算的制約により不可能であった．以上の成果をMicrobiology Spectrum誌に投稿し，現在Major revisionとなっている．
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