2020 Fiscal Year Research-status Report
重症筋無力症の革新的治療AChR-Fcの臨床応用へ向けた生体内での作用機構の解明
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19K07954
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
鵜沢 顕之 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (10533317)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
桑原 聡 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (70282481)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 重症筋無力症 / 新規治療 / B細胞 / 融合蛋白 / 動物モデル / 自己抗体 / 自己免疫疾患 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、重症筋無力症（MG）の新たな治療薬の候補として我々が開発した融合蛋白AChR-Fcの作用機序の一つである病原性B細胞の傷害活性を生体内で証明することである。
昨年度にMGの動物モデルであるexperimental autoimmune MG(EAMG)の能動免疫モデルを、抗原であるアセチルコリン受容体（AChR）をLewisラットに免疫することで作成し、症状がピークとなる免疫後8週目にモデルラットを剖検し、フローサイトメトリーで脾細胞中の病原性B細胞の検出を試みたがうまくいかなかった。脾臓に存在する胚中心活性化B細胞（CD45R+CD27-CD38low)は抗原免疫後、2週頃から産生され、4週をピークに増加するため、より早期の段階での検討が必要と考えられた。
そこで今年度、AChRの免疫後2週目、4週目での脾細胞中の病原性B細胞の検出を試みたが細胞数・割合ともにEAMG群、コントロール群で有意な差を見いだせなかった。フローサイトメトリーでのソーティングがうまくいっていない可能性も考えられたため、まずは、ELISAでラット血清の病原性自己抗体のサブクラスの検討を行うこととした。その結果、ラットのAChR抗体は主にIgG1＜IgG2a＜IgG2bのサブクラスに属することが判明した。今後、再度動物モデルの作成を行い、治療群を含めた多数例の血清を用いて、ELISAで解析し、IgGのサブクラスの解析や、治療による経時的な変化も確認する。
最終的には、ELISPOTでの検討やフローサイトメトリーを用いての病原性B細胞の検出を試みる予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
軽微な遅れはあるものの、全体として研究はおおむね順調に進展していると考えている。ELISAの二次抗体などの濃度検討は終了しており、病原性自己抗体のサブクラスに関してもめどが立っている。
今後フローサイトメトリーでの病原性B細胞検出の適正な方法の検討（ソーティング方法の検討など）や他の検出方法での検討を試みていく。このまま研究が進められれば、研究期間中に十分に研究課題の遂行が可能であると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、EAMGの能動免疫モデルを用いて、経時的な脾細胞中の病原性B細胞数のモニターを試みる。同時にELISA法で病原性抗体であるAChR抗体価の血中濃度の測定も行うことで、両者の関連性を検討する。さらに、それらをモニターすることにより、新規治療薬であるAChR-Fcの適正な投与量・投与方法の検討へ進むことが可能と考えられる。もし、フローサイトメトリー法での検出が難しいようであれば、ELISPOTなど別の方法での病原性B細胞の検出を検討する。
最終的にはEAMGの個体数を増やし統計学的検討も含めた解析を行い、研究成果を国内外の学会や論文で報告していく予定である。
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| Causes of Carryover |
コロナ禍で十分に動物実験や生化学的検討が進められず、学会発表もオンラインとなり旅費がかからなかった。また、消耗品の購入の際、値引きがあり予定よりも安く購入できたこと、また、基礎検討の段階でやや時間を要し、使用する動物数も当初より少なかったので、来年度に余った予算を使用する予定である。
使用計画：繰越金が発生してしまったが、次年度の研究費とあわせて研究遂行に必要な物品などを適宜購入していく予定である。具体的にはモデル動物の作成及びフローサイトメトリー・ELISA、病理学的検討で使用する抗体などの物品を購入する予定である。また適宜、研究成果を国内外の学会や論文で報告するため、旅費や英文校正代にあてる予定である。
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| Remarks |
千葉大学大学院医学研究院脳神経内科学
https://www.m.chiba-u.ac.jp/dept/neurol/
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